1. 配製含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；
2. 取對數生長期的細胞，去除舊培養液，用PBS清洗。
3. 去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養皿表面）把單層生長的細胞消化下來；
4. 離心1000rpm，5min；
5. 去除胰蛋白酶，加入適量配製好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；
6. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；
7. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；
8. 凍存：標準的凍存程式為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然後放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。 細胞凍存管融化 1.將細胞凍存管取出，浸入37℃水浴鍋內，輕輕晃動，注意融化，當融得只剩一個小冰塊時，將細胞插入冰中。 2.加入4℃預冷的培養基，用手指輕彈懸浮細胞團。 3.250g離心10min，去除上清液，再加入培養基，輕輕懸浮。 4.儘量將細胞中的DMSO洗去，計數。 在細胞凍存過程中，所結的冰晶對細胞傷害較大，所以過程一定要慢，DMSO能減少冰晶傷害。在細胞復甦過程中，要快，以減少融化對細胞的傷害，其實還是冰晶的問題。DMSO浸潤的細胞非常脆弱，所以可要儘快將DMSO去除，一定要輕。
1. 配製含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；
2. 取對數生長期的細胞，去除舊培養液，用PBS清洗。
3. 去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養皿表面）把單層生長的細胞消化下來；
4. 離心1000rpm，5min；
5. 去除胰蛋白酶，加入適量配製好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；
6. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；
7. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；
8. 凍存：標準的凍存程式為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然後放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。 細胞凍存管融化 1.將細胞凍存管取出，浸入37℃水浴鍋內，輕輕晃動，注意融化，當融得只剩一個小冰塊時，將細胞插入冰中。 2.加入4℃預冷的培養基，用手指輕彈懸浮細胞團。 3.250g離心10min，去除上清液，再加入培養基，輕輕懸浮。 4.儘量將細胞中的DMSO洗去，計數。 在細胞凍存過程中，所結的冰晶對細胞傷害較大，所以過程一定要慢，DMSO能減少冰晶傷害。在細胞復甦過程中，要快，以減少融化對細胞的傷害，其實還是冰晶的問題。DMSO浸潤的細胞非常脆弱，所以可要儘快將DMSO去除，一定要輕。