（ 1 ）在制板支架上置一專用有機玻璃槽，將固定好的玻璃板下部插入槽內，中部用兩個文具夾固定在支架豎板上。在槽內倒入已充分溶化的瓊脂，冷凝後封閉膠腔底部。
（ 2 ）用直徑約 2mm 的聚乙烯管連線好梯度混合器、恆流泵、凝膠模。
（ 3 ） 30% 膠液的配製取 50ml 燒杯一隻，加凝膠貯液① 14ml ，水 14ml, 10 過硫酸銨 5 μ l ，減壓抽氣 10min 。
（ 4 ） 4% 膠液的配製 取 50ml 燒杯一隻，加凝膠貯液② 14ml ，水 14ml, 10% 過硫酸銨 5 μ l ，減壓抽氣 10min 。
（ 5 ）灌製梯度膠在兩膠液中分別加入 TEMED 15 μ l ，搖勻，分別吸取 18ml 膠液於梯度混合器相應的混合杯中。開啟磁力攪拌器和梯度混合器開關，接通恆流泵，將梯度混合器中的膠液緩緩輸入膠腔中。事先應將輸液管出口由膠腔上口中央伸向底部，隨著膠腔內液麵的升高逐漸提高輸液管，使管口始終接近液麵而不伸入液體內部。灌膠的流速要適當，以管口流出液對液麵不形成衝擊為好。
（ 6 ）灌膠完畢後，在液麵上小心地加入 25 ％乙醇約 0 . 5 cm 封閉膠面。靜置半小時左右即可聚合。
（ 7 ）待凝膠聚合後，倒掉乙醇溶液，用濾紙條吸乾上層殘留液，吸取 5 ml 4% 膠液，加入 5ulTEMED ，於燒杯中輕輕搖勻，加到梯度膠上，迅速插入樣品梳，樣品梳下沿剛好觸及梯度膠面為宜，靜置聚合。
（ 8 ）凝膠聚合後，拔掉樣品梳，裝好電泳槽，在上下槽中注入一電極緩衝液。
（ 9 ）待測樣品的製備同標準蛋白質，製備好的樣品用微量注射器點樣，每樣品槽點樣 25 一 50 μ l 。
（ 10 ）上槽為負極，下槽為正極，連線好電泳儀，用恆壓（ l00V 左右）或恆流 (20mA 左右）電泳。當指示劑跑出膠片後，將電壓升高至 150V ，繼續電泳 15h 左右。
（ 11 ）剝膠後用蒸餾水洗滌膠片，然後浸入染色液中 4--5 h 或過夜。取出後用自來水稍加洗滌，置於脫色液中振盪脫色，中途更換脫色液數次，直至背景清晰為止。
（ 1 ）在制板支架上置一專用有機玻璃槽，將固定好的玻璃板下部插入槽內，中部用兩個文具夾固定在支架豎板上。在槽內倒入已充分溶化的瓊脂，冷凝後封閉膠腔底部。
（ 2 ）用直徑約 2mm 的聚乙烯管連線好梯度混合器、恆流泵、凝膠模。
（ 3 ） 30% 膠液的配製取 50ml 燒杯一隻，加凝膠貯液① 14ml ，水 14ml, 10 過硫酸銨 5 μ l ，減壓抽氣 10min 。
（ 4 ） 4% 膠液的配製 取 50ml 燒杯一隻，加凝膠貯液② 14ml ，水 14ml, 10% 過硫酸銨 5 μ l ，減壓抽氣 10min 。
（ 5 ）灌製梯度膠在兩膠液中分別加入 TEMED 15 μ l ，搖勻，分別吸取 18ml 膠液於梯度混合器相應的混合杯中。開啟磁力攪拌器和梯度混合器開關，接通恆流泵，將梯度混合器中的膠液緩緩輸入膠腔中。事先應將輸液管出口由膠腔上口中央伸向底部，隨著膠腔內液麵的升高逐漸提高輸液管，使管口始終接近液麵而不伸入液體內部。灌膠的流速要適當，以管口流出液對液麵不形成衝擊為好。
（ 6 ）灌膠完畢後，在液麵上小心地加入 25 ％乙醇約 0 . 5 cm 封閉膠面。靜置半小時左右即可聚合。
（ 7 ）待凝膠聚合後，倒掉乙醇溶液，用濾紙條吸乾上層殘留液，吸取 5 ml 4% 膠液，加入 5ulTEMED ，於燒杯中輕輕搖勻，加到梯度膠上，迅速插入樣品梳，樣品梳下沿剛好觸及梯度膠面為宜，靜置聚合。
（ 8 ）凝膠聚合後，拔掉樣品梳，裝好電泳槽，在上下槽中注入一電極緩衝液。
（ 9 ）待測樣品的製備同標準蛋白質，製備好的樣品用微量注射器點樣，每樣品槽點樣 25 一 50 μ l 。
（ 10 ）上槽為負極，下槽為正極，連線好電泳儀，用恆壓（ l00V 左右）或恆流 (20mA 左右）電泳。當指示劑跑出膠片後，將電壓升高至 150V ，繼續電泳 15h 左右。
（ 11 ）剝膠後用蒸餾水洗滌膠片，然後浸入染色液中 4--5 h 或過夜。取出後用自來水稍加洗滌，置於脫色液中振盪脫色，中途更換脫色液數次，直至背景清晰為止。