雙縮脲試劑由NaOH溶液（0.1g/mL）和CuSO₄溶液（0.01g/mL）配製而成，配製比例為5：1。但是雙縮脲試劑不用現配現用，先加入NaoH營造鹼性環境，再加入CuSO₄。雙縮脲反應主要涉及肽鍵，因此受蛋白質特異性影響較小。且使用試劑價廉易得，操作簡便，可測定的範圍為1～10mg蛋白質，適於精度要求不太高的蛋白質含量的測定，能測出的蛋白質含量須在約0.5mg以上。雙縮脲法的缺點是精確度低、所需樣品量大。干擾此測定的物質包括在性質上是氨基酸或肽的緩衝液，如TrIs緩衝液，因為它們產生陽性呈色反應，銅離子也容易被還原，有時出現紅色沉澱。擴充套件資料雙縮脲法雙縮脲（NH₂CONHCONH₂）是兩個分子脲經180℃左右加熱，放出一個分子氨後得到的產物。在強鹼性溶液中，雙縮脲與二價銅離子形成紫色絡合物，稱為雙縮脲反應。凡具有兩個醯胺基或兩個直接連線的肽鍵，或能夠以一箇中間碳原子相連的肽鍵，這類化合物都有雙縮脲反應。紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關，故可用來測定蛋白質含量。干擾這一測定的物質主要有：硫酸銨、Tris緩衝液和某些氨基酸等。此法的優點是較快速 ，不同的蛋白質產生顏色的深淺相近，以及干擾物質少。主要的缺點是靈敏度差，不適合微量蛋白的測定。2、試劑與器材試劑：標準蛋白質溶液：用標準的結晶牛血清清蛋白（BSA）或標準酪蛋白，配製成10mg/ml的標準蛋白溶液，可用BSA濃度1mg/ml的A280為0.66來校正其純度。如有需要，標準蛋白質還可預先用微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量，計算出其純度，再根據其純度，稱量配製成標準蛋白質溶液。牛血清清蛋白用H₂O 或0.9%NaCl配製，酪蛋白用0.05N NaOH配製。雙縮脲試劑：稱以1.50克硫酸銅（CuSO₄·5H₂O）和6.0克酒石酸鉀鈉（KNaC₄H4O₆·4H₂O），用500毫升水溶解，在攪拌下加入300毫升10% NaOH溶液，用水稀釋到1升，貯存於塑膠瓶中（或內壁塗以石蠟的瓶中）。此試劑可長期儲存。若貯存瓶中有黑色沉澱出現，則需要重新配製。器材：可見光分光光度計、大試管15支、旋渦混合器等。3、操作方法標準曲線的測定：取12支試管分兩組，分別加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的標準蛋白質溶液，用水補足到1毫升，然後加入4毫升雙縮脲試劑。充分搖勻後，在室溫（20~25℃）下放置30分鐘，於540nm處進行比色測定。用未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照液。取兩組測定的平均值，以蛋白質的含量為橫座標，光吸收值為縱座標繪製標準曲線。樣品的測定：取2~3個試管，用上述同樣的方法，測定未知樣品的蛋白質濃度。注意樣品濃度不要超過10mg/ml。