氨基酸離鑑定——紙層析 ,實驗目 掌握氨基酸紙層析原理,析待 測品氨基酸. 二,實驗原理 紙層析濾紙惰性支援物配層析.濾紙纖維羥基具親水性,吸附層水作固定相,機溶劑流相.機相流經固定相,物質兩相間斷配離. 溶質濾紙移速度用Rf值表示: Rf=原點層析斑點距離/原點溶劑前沿距離 定條件某種物質Rf值數.Rf值與物質結構,性質,溶劑系統,層析濾紙質量層析溫度等素關.本實驗利用紙層析離氨基酸. 三,實驗器材 (1)燒杯(5000mL):1/組 (2)微量注射器(100 L):1/ 組. (3)噴霧器:公用. (4)培養皿:1/組. (5)層析濾紙(22cm,寬14cm新華號濾紙):1張/組. (6)直尺,鉛筆:自備. (7)電吹風:1/組. (8)托盤,針,白線:1套/組. (9)手套:1雙/組. (10)塑膠薄膜:公用. (11)燒杯:50mL,1/組. 四,實驗試劑 (1)擴充套件劑:4體積丁醇1體積冰醋酸放入液漏斗,與5體積水混合,充振盪,靜置層,棄層水層. (2)氨基酸溶液:0.5%已知氨基酸溶液3種(賴氨酸,苯丙氨酸,纈氨酸),0.5%待測氨基酸液1種. (3)顯色劑:0.1%水合茚三酮丁醇溶液. 實驗試劑 五,實驗操作 檢查培養皿否乾燥,潔淨;若否,其洗淨並置於乾燥箱內120℃烘乾. (1)平衡:剪塊塑膠薄膜鋪桌面,層析缸或燒杯置於塑膠薄膜,再盛約20mL展層溶液燒杯置於倒置層析缸或燒杯,用塑膠薄膜密封起,平衡20min. (2)規劃:帶手套,取寬約14cm,高約22cm層析濾紙張.紙端距邊緣2cm處輕輕用鉛筆劃條平行於底邊直線A,直線做4記號,記號間間隔2cm,原點位置.另距左邊緣1cm處畫條平行於左邊緣直線B,B線A,B兩線交點原點標明刻度(釐米單位),參見左圖. (3)點:用微量注射器別取10mL左右氨基酸品(每取前都要用蒸餾水洗滌微量注射器,免交叉汙染),點四位置.擠滴點,同位置需點2～3,2～3mL/,每點完點,立刻用電吹風熱風吹乾再點,保證每點紙擴散直徑超3mm.每須點4,其3已知,1待測品. (4)層析:用針,線濾紙縫筒狀,紙兩側 邊緣能接觸且要保持平行,參見圖3-3.向培養皿加入擴充套件劑,使其液麵高度達1cm左右,點濾紙筒直立於培養皿(點端,擴充套件劑液麵A線約1cm),罩燒杯,仍用塑膠薄膜密封.擴充套件劑升A線始計,每隔定間測定擴充套件劑升高度,填入表3-1.升15～18cm,取濾紙,剪斷連線,立即用鉛筆描溶劑前沿線,迅速用電吹風熱風吹乾. (5)顯色:用噴霧器通風廚向濾紙均勻噴0.1%茚三酮丁醇溶液,立即用熱風吹乾,即顯各層析斑點,參見左圖. (6)計算各種氨基酸Rf值,並判斷混合品都哪些氨基酸,各自實驗結貼實驗報告,見表3-2. (7)層析間橫座標,擴充套件劑升高度縱座標畫圖,求擴充套件劑升18cm所需要間. (8)微量注射器內外用蒸餾水清洗乾淨,倒掉用展層液平衡液,培養皿洗淨,整理桌面儀器試劑
氨基酸離鑑定——紙層析 ,實驗目 掌握氨基酸紙層析原理,析待 測品氨基酸. 二,實驗原理 紙層析濾紙惰性支援物配層析.濾紙纖維羥基具親水性,吸附層水作固定相,機溶劑流相.機相流經固定相,物質兩相間斷配離. 溶質濾紙移速度用Rf值表示: Rf=原點層析斑點距離/原點溶劑前沿距離 定條件某種物質Rf值數.Rf值與物質結構,性質,溶劑系統,層析濾紙質量層析溫度等素關.本實驗利用紙層析離氨基酸. 三,實驗器材 (1)燒杯(5000mL):1/組 (2)微量注射器(100 L):1/ 組. (3)噴霧器:公用. (4)培養皿:1/組. (5)層析濾紙(22cm,寬14cm新華號濾紙):1張/組. (6)直尺,鉛筆:自備. (7)電吹風:1/組. (8)托盤,針,白線:1套/組. (9)手套:1雙/組. (10)塑膠薄膜:公用. (11)燒杯:50mL,1/組. 四,實驗試劑 (1)擴充套件劑:4體積丁醇1體積冰醋酸放入液漏斗,與5體積水混合,充振盪,靜置層,棄層水層. (2)氨基酸溶液:0.5%已知氨基酸溶液3種(賴氨酸,苯丙氨酸,纈氨酸),0.5%待測氨基酸液1種. (3)顯色劑:0.1%水合茚三酮丁醇溶液. 實驗試劑 五,實驗操作 檢查培養皿否乾燥,潔淨;若否,其洗淨並置於乾燥箱內120℃烘乾. (1)平衡:剪塊塑膠薄膜鋪桌面,層析缸或燒杯置於塑膠薄膜,再盛約20mL展層溶液燒杯置於倒置層析缸或燒杯,用塑膠薄膜密封起,平衡20min. (2)規劃:帶手套,取寬約14cm,高約22cm層析濾紙張.紙端距邊緣2cm處輕輕用鉛筆劃條平行於底邊直線A,直線做4記號,記號間間隔2cm,原點位置.另距左邊緣1cm處畫條平行於左邊緣直線B,B線A,B兩線交點原點標明刻度(釐米單位),參見左圖. (3)點:用微量注射器別取10mL左右氨基酸品(每取前都要用蒸餾水洗滌微量注射器,免交叉汙染),點四位置.擠滴點,同位置需點2～3,2～3mL/,每點完點,立刻用電吹風熱風吹乾再點,保證每點紙擴散直徑超3mm.每須點4,其3已知,1待測品. (4)層析:用針,線濾紙縫筒狀,紙兩側 邊緣能接觸且要保持平行,參見圖3-3.向培養皿加入擴充套件劑,使其液麵高度達1cm左右,點濾紙筒直立於培養皿(點端,擴充套件劑液麵A線約1cm),罩燒杯,仍用塑膠薄膜密封.擴充套件劑升A線始計,每隔定間測定擴充套件劑升高度,填入表3-1.升15～18cm,取濾紙,剪斷連線,立即用鉛筆描溶劑前沿線,迅速用電吹風熱風吹乾. (5)顯色:用噴霧器通風廚向濾紙均勻噴0.1%茚三酮丁醇溶液,立即用熱風吹乾,即顯各層析斑點,參見左圖. (6)計算各種氨基酸Rf值,並判斷混合品都哪些氨基酸,各自實驗結貼實驗報告,見表3-2. (7)層析間橫座標,擴充套件劑升高度縱座標畫圖,求擴充套件劑升18cm所需要間. (8)微量注射器內外用蒸餾水清洗乾淨,倒掉用展層液平衡液,培養皿洗淨,整理桌面儀器試劑