免疫熒光法免疫熒光法的基本原理是將已知的抗體或抗原分子標記上熒光素,當與其相對應的抗原或抗體起反應時,在形成的複合物上就帶有一定量的熒光素,在熒光顯微鏡下就可以看見發出熒光的抗原抗體結合部位,檢測出抗原或抗體。常用的熒光素有①異硫氰酸熒光素(fluorecein isothiocyante,FITC),為黃色、橙黃色或褐黃色結晶粉末,有兩種異構體,易溶於水和酒精等溶劑。分子量為389,最大吸收光譜為490~495,最大發射光譜為520~530urn,呈現明亮的黃綠色熒光,是最常用的標記抗體的熒光素。②四甲基異氰酸羅達明(tetrametrylrhodarnine isothiocyante,TRITC)是一種紫紅色粉末,較穩定,是羅達明(rhodamine)的衍生物。最大吸收光譜550urn,最大發射光譜620urn呈橙紅色熒光,與FITC發射的黃綠色熒光對比鮮明,常用於雙標記染色。按照抗原抗體反應的結合步聚,免疫熒光法可分為以下三種。1.直接法用熒光素標記的特異性抗體直接與相應的抗原結合,以檢查出相應的抗原成分。2.間接法先用特異性抗體與相應的抗原結合,洗去未結合的抗體,再用熒光素標記的抗特異性抗體(間接熒光抗體)與特異性抗體相結合,形成抗原一特異性抗體一間接熒光抗體的複合物。在此複合物上帶有比直接法更多的熒光抗體,所以,此法較直接法靈敏。3.補體法用特異性的抗體和補體的混合液與標本上的抗原反應,補體就結合在抗原抗體複合物上,再用抗補體的熒光抗體與之相結合,就形成了抗原一抗體一補體一抗補體熒光抗體的複合物。熒光顯微鏡下所見到的發出熒光的部分即是抗原所在的部位。補體法具有敏感性強的優勢,同時適用於各種不同種屬來源的特異性抗體的標記顯示,在各種不同種屬動物抗體的檢測上為最常用的技術方法
免疫熒光法免疫熒光法的基本原理是將已知的抗體或抗原分子標記上熒光素,當與其相對應的抗原或抗體起反應時,在形成的複合物上就帶有一定量的熒光素,在熒光顯微鏡下就可以看見發出熒光的抗原抗體結合部位,檢測出抗原或抗體。常用的熒光素有①異硫氰酸熒光素(fluorecein isothiocyante,FITC),為黃色、橙黃色或褐黃色結晶粉末,有兩種異構體,易溶於水和酒精等溶劑。分子量為389,最大吸收光譜為490~495,最大發射光譜為520~530urn,呈現明亮的黃綠色熒光,是最常用的標記抗體的熒光素。②四甲基異氰酸羅達明(tetrametrylrhodarnine isothiocyante,TRITC)是一種紫紅色粉末,較穩定,是羅達明(rhodamine)的衍生物。最大吸收光譜550urn,最大發射光譜620urn呈橙紅色熒光,與FITC發射的黃綠色熒光對比鮮明,常用於雙標記染色。按照抗原抗體反應的結合步聚,免疫熒光法可分為以下三種。1.直接法用熒光素標記的特異性抗體直接與相應的抗原結合,以檢查出相應的抗原成分。2.間接法先用特異性抗體與相應的抗原結合,洗去未結合的抗體,再用熒光素標記的抗特異性抗體(間接熒光抗體)與特異性抗體相結合,形成抗原一特異性抗體一間接熒光抗體的複合物。在此複合物上帶有比直接法更多的熒光抗體,所以,此法較直接法靈敏。3.補體法用特異性的抗體和補體的混合液與標本上的抗原反應,補體就結合在抗原抗體複合物上,再用抗補體的熒光抗體與之相結合,就形成了抗原一抗體一補體一抗補體熒光抗體的複合物。熒光顯微鏡下所見到的發出熒光的部分即是抗原所在的部位。補體法具有敏感性強的優勢,同時適用於各種不同種屬來源的特異性抗體的標記顯示,在各種不同種屬動物抗體的檢測上為最常用的技術方法