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  • 1 # 使用者2204783903565

    1 )核 DNA 和線粒體 DNA

    1. 當細胞培養到約 107 細胞 /ml 時,離心( 5 秒)收集細胞,再懸浮在 70 %乙醇中。

    2. 固定 5 分鐘或 5 分鐘以上,用水洗 2 次。

    3. 將細胞懸浮在含有 50ng/ml 的 4 , 6- 二脒基 -2 苯基吲哚的封固劑中。 1mg/ml 的 4 , 6- 二脒基 -2 苯基吲哚母液可在- 20 ℃下貯存。

    4. 用紫外濾片觀察。

    2 )線粒體

    1. 在生長培養基中培養細胞達到約 107 細胞 /ml 時,加入 100ng/ml 3 , 3’- 二已基噁羰花青碘化物( DiOC6 , Sigma D3652 或 Molecular Probes )用乙醇把 1mg/ml 母液稀釋到 1/104 。

    2. 培養 5 分鐘或 5 分鐘以上,用熒光素濾片觀察。

    3 )液泡

    1. 當細胞生長到約 107 細胞 /ml 時,離心收集細胞( 5 秒),懸浮在含有 50mmol/L 檸檬酸鈉( pH4.0 )的 YPD 中。

    2. 加 CDCFDA (羧基 -2’,7’- 二氯 - 熒光素雙乙酸鹽)到終濃度為 10 μ mol/L 。

    3. 保溫10 分鐘或 10 分鐘以上,用熒光濾片觀察。

    4 )牙痕和幾丁質

    1. 用生長培養基培養細胞達 107 細胞 /ml 時,加 100 μ g/ml Calcofluor (熒光發光劑 28 ; Sigma F3543 )(用水將 1mg/ml 母液稀釋到 1/10 ,母液可在- 20 ℃下黑暗儲存數星期)。

    2. 培養 5 分鐘或 5 分鐘以上,用水洗 2 次,用紫外濾片觀察

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