在 Western Blot 中使用內參其實就是在 WB 過程中另外用內參對應的抗體檢測內參,這樣在檢測目的產物的同時可以檢測內參的表達,由於內參在各組織和細胞中的表達相對恆定,藉助檢測每個樣品內參的量就可以用於校正蛋白質定量、上樣過程中存在的實驗誤差,保證實驗結果的準確性。
此外使用內參可以作為空白對照,檢測蛋白轉膜情況是否完全、整個 Western Blot 顯色或者發光體系是否正常。
常用的蛋白質內參有 GAPDH 和細胞骨架蛋白 beta-actin 或 beta-tubulin。 一般要選擇一個在處理因素作用的條件下蛋白含量不會發生改變的蛋白作內參。——厚百 Western Blot試劑
以下是常見的內參:
內參名稱 分子量大小 適用範圍
Beta-actin 43 kDa 胞漿和全細胞
GAPDH 30-40 kDa 胞漿和全細胞
Tubulin 55 kDa 胞漿和全細胞
VCDA1/Porin 31 kDa 線粒體
COXIV 16 kDa 線粒體
Lamin B1 66 kDa 細胞核
TBP 38 kDa 細胞核
在 Western Blot 中使用內參其實就是在 WB 過程中另外用內參對應的抗體檢測內參,這樣在檢測目的產物的同時可以檢測內參的表達,由於內參在各組織和細胞中的表達相對恆定,藉助檢測每個樣品內參的量就可以用於校正蛋白質定量、上樣過程中存在的實驗誤差,保證實驗結果的準確性。
此外使用內參可以作為空白對照,檢測蛋白轉膜情況是否完全、整個 Western Blot 顯色或者發光體系是否正常。
常用的蛋白質內參有 GAPDH 和細胞骨架蛋白 beta-actin 或 beta-tubulin。 一般要選擇一個在處理因素作用的條件下蛋白含量不會發生改變的蛋白作內參。——厚百 Western Blot試劑
以下是常見的內參:
內參名稱 分子量大小 適用範圍
Beta-actin 43 kDa 胞漿和全細胞
GAPDH 30-40 kDa 胞漿和全細胞
Tubulin 55 kDa 胞漿和全細胞
VCDA1/Porin 31 kDa 線粒體
COXIV 16 kDa 線粒體
Lamin B1 66 kDa 細胞核
TBP 38 kDa 細胞核