做免疫組化前需要注意的方面：1、抗原有無丟失主要看組織切片的新鮮程度，一般切片室溫儲存超過3-6個月，可能切片內的抗原丟失很嚴重，此時可以透過重新用石蠟塊切片來進一步驗證（蠟塊需要低溫儲存）。2、石蠟切片在製作過程中可能因醛基對抗原決定族的封閉，這需要透過抗原修復來充分暴露，從而增加抗原抗體結合反應，提高陽性率，一般用6min*4次中火微波抗原修復，用枸櫞酸鈉緩衝液。3、注意檢查抗體有無選擇錯誤和抗體孵育條件是否不適。5、抗體孵育時間過短，容易導致陰性結果。一般一抗我建議4℃孵育過夜和37℃復溫45min；二抗我一般37℃30min。我不喜歡參照二抗染色試劑盒說明書。6、抗體濃度過低。這是陰性結果的最可能原因。必須提高稀釋度，我一般初次做一種新抗體，喜歡先用說明書建議的低濃度和高濃度做一次，然後決定是向高還是低方向摸索。一般先決定二抗的濃度（工作液就好辦了，直接滴加），重點摸索一抗的最適濃度。注意：免疫反應中存在前帶和後帶效應，這提示不是濃度越高，陽性率就越高，反之亦然。7、血清封閉時間也可相應縮短。一般10-30min，但這個時間可以調整，封閉主要是降低切片的總體背景著色。8、細胞通透也不可忽視。許多戰友認為石蠟切片一般不需細胞通透，因為切片時可能已經把細胞切開了，但對於胞核蛋白，建議還是通透一下，促進抗體等試劑充分進入參與反應。擴充套件資料：一、免疫組化的分類：1、免疫熒光細胞化學技術：將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當抗原抗體複合物中的熒光素受激發光的照射後會發出一定波長的熒光，從而可以確定組織中的抗原定位或定量。2、免疫酶細胞化學技術：是目前免疫組織化學研究中最常用的技術，基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用，然後加入酶的底物，生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒，透過光鏡或電鏡，對細胞或組織內的相應抗原進行定位或定性研究。3、免疫膠體金技術：就是用膠體金標記一抗，二抗或其他的能特異性的結合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作為探針對組織或細胞內的抗原進行定性，定位或定量研究。由於膠體金的電子密度高，多用於免疫電鏡的單標記或多標記的定位研究。二、免疫組化的原理：抗體和抗原之間的結合具有高度的特異性，免疫組織化學正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學物質提取出來，以此作為抗原或半抗原，透過免疫動物後獲得特異性的抗體，再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質。由於抗原與抗體的複合物是無色的，因此還必須藉助於組織化學的方法將抗原抗體結合的部位顯示出來，以其達到對組織或細胞中的未知抗原進行定性，定位或定量的研究。