如何確定RNA質量的經驗談

1）檢測RNA溶液的吸光度

280、320、230、260nm下的吸光度分別代表了核酸、背景（溶液渾濁度）、鹽濃度和蛋白等有機物的值。一般的，我們只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0時，我們認為RNA中蛋白或者時其他有機物的汙染是可以容忍的，不過要注意，當你用Tris作為緩衝液檢測吸光度時，R值可能會大於2（一般應該是2.2時，說明RNA已經水解成單核酸了。

2）RNA的電泳圖譜

一般的，RNA的電泳都是用變性膠進行的，但是根據我的經驗，如果你僅僅是為了檢測RNA的質量是沒有必要進行如此麻煩的實驗的，用普通的瓊脂糖膠就可以了。

電泳的目的是在於檢測28S和18S條帶的完整性和他們的比值，或者是mRNA smear的完整性。一般的，如果28S和18S條帶明亮、清晰、條帶銳利（指條帶的邊緣清晰），並且28S的亮度在18S條帶的兩倍以上，我們認為RNA的質量是好。

以上是我們常用的兩種方法，但是這兩種方法都無法明確的告訴我們RNA溶液中有沒有殘留的RNA酶。如果溶液中有非常微量的RNA酶，用以上方法我們很難察覺，但是大部分後續的酶學反應都是在37度以上並且是長時間進行的。這樣，如果RNA溶液中有非常微量的RNA酶，那麼在後續的實驗中就會有非常適合的環境和時間發揮它們的作用了，當然這時你的實驗也就完了。

下面，我們介紹一個可以確認RNA溶液中有沒有殘留的RNA酶的方法。

3）保溫試驗

方法很簡單的，按照樣品濃度，從RNA溶液中吸取兩份1000 ng的RNA加入至0.5 ml的

離心管

中,並且用pH7.0的Tris緩衝液補充到10 ul的總體積，然後密閉管蓋。把其中一份放入70℃的恆溫水浴中,保溫1 h。另一份放置在-20℃冰箱中儲存1 h。

時間到了之後，取出兩份樣本進行電泳。電泳完成後，比較兩者的電泳條帶。如果兩者的條帶一致或者無明顯差別（當然，它們的條帶也要符合方法2中的條件），則說明RNA溶液中沒有殘留的RNA酶汙染，RNA的質量很好。相反的，如果70℃保溫的樣本有明顯的降解，則說明RNA溶液中有RNA酶汙染。