（一）菌種分離與培養
２．純菌種的分離和培養
菌種組織分離與培養（母種）
配方一
馬鈴薯（去皮）２００克 ; 葡萄糖２０克 ; 瓊脂２０克 ; 水１０００毫升
配製方法：將馬鈴薯切成小塊放入鍋內，加水 1000 毫升，煮沸２０分鐘，用紗布過濾，補水到 1000 毫升 , 放入切碎的瓊脂和葡萄糖，加溫溶解後，ｐＨ值自然，將培養基分裝三角燒瓶內或分裝於試管中，滅菌、放斜面、冷卻接種．培養等，與其它食用菌的培養基配製及制種方法均相同。
配方二
麥麩４０克；葡萄糖２０克；瓊脂２０克；水１０００毫升
配製方法：麥麩加水１１００毫升煮微２０分鐘，用雙層紗布過濾，濾液補水至１０００毫升，放入瓊脂，加熱溶解後，再加葡萄糖煮至全溶，ｐＨ值自然。然後分裝試管或三角燒瓶，再高壓滅菌，放斜面、冷卻、接種、培養，即獲得母種。
如果是藥用，只培養蜜環菌絲體，也就是進行一級擴大培養和二級擴大培養。
３。一級擴大培養用斜面純菌種接種在一級種子培養液中，在一定的條件下進行一級擴大培養。
（１）一號種子培養液
配方：葡萄糖２０克；磷酸二氫鉀２克；磷酸氫二鉀１克；硫酸鎂１．５克；黃豆餅粉或花生餅粉１０克；酵母粉或麥芽１克一２克維生素 １ １０毫克；２０％馬鈴薯汁１０００毫升配製後調ＰＨ值到５．５，分裝於５００毫升的三角瓶內，每瓶裝１５０毫升，高壓滅菌，備用。
（２）二號種子培養液
配方：馬鈴薯（去皮）２００克；葡萄糖２０克；硫酸鎂０．５克；磷酸二氫鉀１ . ５克，蛋白腖３克；維生素Ｂ1 １０毫克，清水１０００毫升培養液培養後，ｐＨ值自然，分裝於５００毫升三角燒瓶中，每瓶裝１５０毫升，高壓滅菌，備用。
（３）三號種子培養液
配方：麥麩５０克；葡萄糖２０克；硫酸鎂０．５克；磷酸二氫鉀１ .５ 克，蛋白腖５克，清水１０００毫升
配製方法：先將麥麩水煮２０分鐘，用紗布過濾，補水至１０００毫升，再將其經配料加入濾液中溶解，ＰＨ值自然，分裝於５００毫升的三角燒瓶內，每瓶裝５０毫升，高壓滅菌，備用。
接種方法：在無菌條件下用接種鉤將斜面菌種打碎，然後轉移到培養瓶內。裝量１５０毫升的培養瓶可轉移一個斜面的菌種，裝量為５０毫升的瓶，可轉移１／３斜面的菌種。接種後用４層紗布夾回層無菌棉塞瓶口。接種完畢要紮緊瓶口，置室溫２５度的搖床上進行振盪培養。培養１．５天一２天后，可見培養液發出熒光，３天一４天培養液呈米黃色，熒光增加，輕搖培養瓶時，液麵佈滿熒光點，５天一７天后熒光逐漸減弱。如果發現培養液的熒光突然消失，並出現大量泡沫，就表明已被雜菌汙染，應立即淘汰。培養液的熒光最強時，菌絲生長繁殖最旺盛，應停止培養，即為一級種子。
優質的一級種子液粘稠，呈米黃色，或象米粥。菌液中長有黃豆粒大小的菌球體，如培養時間過長，菌液老化，菌球體則變為中空、表面光滑的球體，但這種菌液仍能發微弱熒光。被汙染的菌液，有時也有光滑的小球體，但不發熒光。
４．二級擴大培養
為大量培養純菌種，或大量培養藥用的蜜環菌絲體，可在１０００毫升一５０００毫升的大燒瓶中進行二級擴大培養，也可利用發酵罐進行培養，因此，也叫發酵培養。
（１）一號發酵培養液
配方：葡萄糖２０克；酵母粉３克；磷酸二氫鉀２．５克；硫酸鎂１．５克；麥麩２０克；維生素Ｂ 1 １０毫克；２０％馬鈴薯汁 1000 毫升培養液配製後，ｐＨ植調至５．５，分裝，高壓滅菌，備用。
（２）二號發酵培養液
配方：葡萄糖１％；白蔗糖２％；磷酸二氫鉀０．１５％；硫酸鎂０．０７５％；黃豆餅粉１％；花生餅粉１％配製後． P Ｈ值自然，分裝，高壓滅菌，備用。接種時，要嚴格按無菌製作的程式進行。用移液管將菌種接入一級種子液，在２５度條件下培養３天一４天
5 ．種子液培養條件
（１）一級種子
溫度２４－２６度，在旋轉式搖床上培養１２０天一１４８天，偏心距為４釐米一６釐米，轉速２４０次／分鐘。
（２）二級種子
溫度２６－２８度，在往復式床上培養７２小時一 96 小時，衝程為７釐米，轉速為 90 次／分鐘。
（３）發酵罐
溫度２６－２８度，容量為４０立升的，投料２０立升，攪拌速度為 200 轉／分鐘，通氣量為１： 0 ．５－１： 0 ．８，培養９６－１２０小時。用乙醇提取，再濃縮，將提取物人藥。６．二級團體擴大培養為了利用蜜環菌伴栽天麻，可將蜜環菌採用固體擴大培養，它比液體培養效果好。
二級固體菌種培養基（即原種培養基）
配方（１）：雜木屑或玉米芯粉６８％；玉米粉２０％；麥新１０％；蔗糖；２％。
配製方法：清水拌料，含水量６５％－７０％，裝瓶或裝袋，滅菌，冷卻後接種，在２０－２５度條件下培養２５天一３０天，即成二級固體菌種。
配方（２）：雜木屑４６％；玉米軸粉４０％；麥麩１０％；蔗糖２％；骨粉１％；石膏粉１％清水拌料，含水量６５％－７０％，裝瓶或裝袋，滅菌，冷卻後接種（方法同於一般食用菌），在２０－２５度條件下培養２５％－３０天，菌絲長滿培養基，即為二級固體菌種。
（二）擴大生產
１．菌材和基礎培養料的選擇
（１）菌材的選擇
凡是闊葉樹種（松杉木不能用）都可以用來培養蜜環菌，也可作為培養天麻的菌材。未接菌的木棒或樹枝，統稱為菌材。把木棒接植蜜環菌，長出菌索，帶有菌索的木棒稱為菌棒。菌棒一般直徑４釐米一１０釐米，主要用於培養天麻。如果在２釐米一３釐米粗的樹枝上接種蜜環菌，樹枝上長出菌素，這樣的樹枝稱為菌技，是培養天麻的補充材料。
（２）基礎培養料的選擇
基礎培養料是蜜環菌和天麻生長髮育繁殖所必需的基本物質條件。基礎培養料的優劣將直接影響蜜環菌絲和天麻生長髮育的質量，所以，一定要選擇透氣效能良好，有機質豐富，並疏鬆、易於滲水和保溫，酸鹼度適宜的培養料，基礎培養料的配製方法如下：
天然腐殖土：即山林中的腐殖土，土質疏鬆，團粒結構良，含有豐富的有機營養和無機鹽類，透氣和保水效能強，是較理想的基礎培養料。
半腐熟落葉加沙：晚秋收集闊葉樹落葉，加適量水，堆坑封蓋腐熟。來年春將樹葉取出加小米大小的砂子。樹葉和砂子的比例為５：１，作為基礎培養料。這種培養料體輕、疏鬆、營養豐富。
沙質土壤：土壤疏鬆、透氣性和滲水性良好。
木屑加砂：選擇闊葉樹的粗鋸末加乾淨的粗細混合砂。砂粒象高梁粒大小，事先將砂粒用清水洗淨再用，木屑和砂的比例為２：１或３：１。
稻殼加砂：用新鮮的稻殼加乾淨的小米大小或高梁粒大小的砂子，稻殼和砂的比例為３：１。
２．培養菌棒和菌枝
為栽天麻時有充足的優質菌棒和菌枝，必須選擇適當的培菌時間。最好在７月份開始培養菌棒、菌枝（氣溫在２３－２５度，溼度在６５％－７０％為宜）。８月中旬可以進行一次擴大培養，１１月份開始栽天麻。也可在９月份開始在室內培養。此時室內自然溫度在２０度以下，菌棒、菌枝發菌較慢，但菌絲生命力強，菌索健壯。用這種菌棒、菌技在第二年３月份栽天麻，其效果良好。
培養菌棒和菌枝的方法相同，可以同時進行。接種時可採用打孔接種法，先將木棒和樹枝截成段，再用打孔器打孔（每隔約６釐米一９釐米打一個孔），象黑木耳段木栽培法那樣，向孔內接菌種，進行培養。也可以採用砍魚鱗口接種法，將菌材截成５０釐米一 60 釐米長的段，用刀每隔９釐米一１２釐米砍一個魚鱗口，深度以露出木質部０．５釐米為宜。
培養方法：可以採用坑培法。半坑式培養法、地面砌池培養法等多種形式，但其培菌方法是相同的。下坑（池）培養時，先向坑（池）底層鋪一層基礎培養料，再放一層菌棒、菌技，向接種孔或魚鱗口內塞滿蜜環菌原種菌種，再撒上薄薄一層原種菌種，再鋪上一層培養料。第二層直到第五、六層，方法與第一層相同。如果不用菌種，也可用切碎的帶菌索的段木，放在菌棒、菌枝旁邊，也能起到菌種擴大培養作用，也可用伴栽天麻的舊菇木和新菌材穿插排放，最上層同樣鋪上６釐米厚的基礎培養料，澆透水（土壤含水量４０％左右），再用土封頂。在２０－２５度條件下，１個月左右，即長好蜜環菌菌索。這時可將菌棒、菌枝挖出，用作伴栽天麻和專一培養蜜環菌子實體食用。
（三）蜜環菌的利用
常食蜜環菌於實體（菇），能治療夜盲症，促進眼明，還能醫治人體面板乾燥等症。
（一）菌種分離與培養
２．純菌種的分離和培養
菌種組織分離與培養（母種）
配方一
馬鈴薯（去皮）２００克 ; 葡萄糖２０克 ; 瓊脂２０克 ; 水１０００毫升
配製方法：將馬鈴薯切成小塊放入鍋內，加水 1000 毫升，煮沸２０分鐘，用紗布過濾，補水到 1000 毫升 , 放入切碎的瓊脂和葡萄糖，加溫溶解後，ｐＨ值自然，將培養基分裝三角燒瓶內或分裝於試管中，滅菌、放斜面、冷卻接種．培養等，與其它食用菌的培養基配製及制種方法均相同。
配方二
麥麩４０克；葡萄糖２０克；瓊脂２０克；水１０００毫升
配製方法：麥麩加水１１００毫升煮微２０分鐘，用雙層紗布過濾，濾液補水至１０００毫升，放入瓊脂，加熱溶解後，再加葡萄糖煮至全溶，ｐＨ值自然。然後分裝試管或三角燒瓶，再高壓滅菌，放斜面、冷卻、接種、培養，即獲得母種。
如果是藥用，只培養蜜環菌絲體，也就是進行一級擴大培養和二級擴大培養。
３。一級擴大培養用斜面純菌種接種在一級種子培養液中，在一定的條件下進行一級擴大培養。
（１）一號種子培養液
配方：葡萄糖２０克；磷酸二氫鉀２克；磷酸氫二鉀１克；硫酸鎂１．５克；黃豆餅粉或花生餅粉１０克；酵母粉或麥芽１克一２克維生素 １ １０毫克；２０％馬鈴薯汁１０００毫升配製後調ＰＨ值到５．５，分裝於５００毫升的三角瓶內，每瓶裝１５０毫升，高壓滅菌，備用。
（２）二號種子培養液
配方：馬鈴薯（去皮）２００克；葡萄糖２０克；硫酸鎂０．５克；磷酸二氫鉀１ . ５克，蛋白腖３克；維生素Ｂ1 １０毫克，清水１０００毫升培養液培養後，ｐＨ值自然，分裝於５００毫升三角燒瓶中，每瓶裝１５０毫升，高壓滅菌，備用。
（３）三號種子培養液
配方：麥麩５０克；葡萄糖２０克；硫酸鎂０．５克；磷酸二氫鉀１ .５ 克，蛋白腖５克，清水１０００毫升
配製方法：先將麥麩水煮２０分鐘，用紗布過濾，補水至１０００毫升，再將其經配料加入濾液中溶解，ＰＨ值自然，分裝於５００毫升的三角燒瓶內，每瓶裝５０毫升，高壓滅菌，備用。
接種方法：在無菌條件下用接種鉤將斜面菌種打碎，然後轉移到培養瓶內。裝量１５０毫升的培養瓶可轉移一個斜面的菌種，裝量為５０毫升的瓶，可轉移１／３斜面的菌種。接種後用４層紗布夾回層無菌棉塞瓶口。接種完畢要紮緊瓶口，置室溫２５度的搖床上進行振盪培養。培養１．５天一２天后，可見培養液發出熒光，３天一４天培養液呈米黃色，熒光增加，輕搖培養瓶時，液麵佈滿熒光點，５天一７天后熒光逐漸減弱。如果發現培養液的熒光突然消失，並出現大量泡沫，就表明已被雜菌汙染，應立即淘汰。培養液的熒光最強時，菌絲生長繁殖最旺盛，應停止培養，即為一級種子。
優質的一級種子液粘稠，呈米黃色，或象米粥。菌液中長有黃豆粒大小的菌球體，如培養時間過長，菌液老化，菌球體則變為中空、表面光滑的球體，但這種菌液仍能發微弱熒光。被汙染的菌液，有時也有光滑的小球體，但不發熒光。
４．二級擴大培養
為大量培養純菌種，或大量培養藥用的蜜環菌絲體，可在１０００毫升一５０００毫升的大燒瓶中進行二級擴大培養，也可利用發酵罐進行培養，因此，也叫發酵培養。
（１）一號發酵培養液
配方：葡萄糖２０克；酵母粉３克；磷酸二氫鉀２．５克；硫酸鎂１．５克；麥麩２０克；維生素Ｂ 1 １０毫克；２０％馬鈴薯汁 1000 毫升培養液配製後，ｐＨ植調至５．５，分裝，高壓滅菌，備用。
（２）二號發酵培養液
配方：葡萄糖１％；白蔗糖２％；磷酸二氫鉀０．１５％；硫酸鎂０．０７５％；黃豆餅粉１％；花生餅粉１％配製後． P Ｈ值自然，分裝，高壓滅菌，備用。接種時，要嚴格按無菌製作的程式進行。用移液管將菌種接入一級種子液，在２５度條件下培養３天一４天
5 ．種子液培養條件
（１）一級種子
溫度２４－２６度，在旋轉式搖床上培養１２０天一１４８天，偏心距為４釐米一６釐米，轉速２４０次／分鐘。
（２）二級種子
溫度２６－２８度，在往復式床上培養７２小時一 96 小時，衝程為７釐米，轉速為 90 次／分鐘。
（３）發酵罐
溫度２６－２８度，容量為４０立升的，投料２０立升，攪拌速度為 200 轉／分鐘，通氣量為１： 0 ．５－１： 0 ．８，培養９６－１２０小時。用乙醇提取，再濃縮，將提取物人藥。６．二級團體擴大培養為了利用蜜環菌伴栽天麻，可將蜜環菌採用固體擴大培養，它比液體培養效果好。
二級固體菌種培養基（即原種培養基）
配方（１）：雜木屑或玉米芯粉６８％；玉米粉２０％；麥新１０％；蔗糖；２％。
配製方法：清水拌料，含水量６５％－７０％，裝瓶或裝袋，滅菌，冷卻後接種，在２０－２５度條件下培養２５天一３０天，即成二級固體菌種。
配方（２）：雜木屑４６％；玉米軸粉４０％；麥麩１０％；蔗糖２％；骨粉１％；石膏粉１％清水拌料，含水量６５％－７０％，裝瓶或裝袋，滅菌，冷卻後接種（方法同於一般食用菌），在２０－２５度條件下培養２５％－３０天，菌絲長滿培養基，即為二級固體菌種。
（二）擴大生產
１．菌材和基礎培養料的選擇
（１）菌材的選擇
凡是闊葉樹種（松杉木不能用）都可以用來培養蜜環菌，也可作為培養天麻的菌材。未接菌的木棒或樹枝，統稱為菌材。把木棒接植蜜環菌，長出菌索，帶有菌索的木棒稱為菌棒。菌棒一般直徑４釐米一１０釐米，主要用於培養天麻。如果在２釐米一３釐米粗的樹枝上接種蜜環菌，樹枝上長出菌素，這樣的樹枝稱為菌技，是培養天麻的補充材料。
（２）基礎培養料的選擇
基礎培養料是蜜環菌和天麻生長髮育繁殖所必需的基本物質條件。基礎培養料的優劣將直接影響蜜環菌絲和天麻生長髮育的質量，所以，一定要選擇透氣效能良好，有機質豐富，並疏鬆、易於滲水和保溫，酸鹼度適宜的培養料，基礎培養料的配製方法如下：
天然腐殖土：即山林中的腐殖土，土質疏鬆，團粒結構良，含有豐富的有機營養和無機鹽類，透氣和保水效能強，是較理想的基礎培養料。
半腐熟落葉加沙：晚秋收集闊葉樹落葉，加適量水，堆坑封蓋腐熟。來年春將樹葉取出加小米大小的砂子。樹葉和砂子的比例為５：１，作為基礎培養料。這種培養料體輕、疏鬆、營養豐富。
沙質土壤：土壤疏鬆、透氣性和滲水性良好。
木屑加砂：選擇闊葉樹的粗鋸末加乾淨的粗細混合砂。砂粒象高梁粒大小，事先將砂粒用清水洗淨再用，木屑和砂的比例為２：１或３：１。
稻殼加砂：用新鮮的稻殼加乾淨的小米大小或高梁粒大小的砂子，稻殼和砂的比例為３：１。
２．培養菌棒和菌枝
為栽天麻時有充足的優質菌棒和菌枝，必須選擇適當的培菌時間。最好在７月份開始培養菌棒、菌枝（氣溫在２３－２５度，溼度在６５％－７０％為宜）。８月中旬可以進行一次擴大培養，１１月份開始栽天麻。也可在９月份開始在室內培養。此時室內自然溫度在２０度以下，菌棒、菌枝發菌較慢，但菌絲生命力強，菌索健壯。用這種菌棒、菌技在第二年３月份栽天麻，其效果良好。
培養菌棒和菌枝的方法相同，可以同時進行。接種時可採用打孔接種法，先將木棒和樹枝截成段，再用打孔器打孔（每隔約６釐米一９釐米打一個孔），象黑木耳段木栽培法那樣，向孔內接菌種，進行培養。也可以採用砍魚鱗口接種法，將菌材截成５０釐米一 60 釐米長的段，用刀每隔９釐米一１２釐米砍一個魚鱗口，深度以露出木質部０．５釐米為宜。
培養方法：可以採用坑培法。半坑式培養法、地面砌池培養法等多種形式，但其培菌方法是相同的。下坑（池）培養時，先向坑（池）底層鋪一層基礎培養料，再放一層菌棒、菌技，向接種孔或魚鱗口內塞滿蜜環菌原種菌種，再撒上薄薄一層原種菌種，再鋪上一層培養料。第二層直到第五、六層，方法與第一層相同。如果不用菌種，也可用切碎的帶菌索的段木，放在菌棒、菌枝旁邊，也能起到菌種擴大培養作用，也可用伴栽天麻的舊菇木和新菌材穿插排放，最上層同樣鋪上６釐米厚的基礎培養料，澆透水（土壤含水量４０％左右），再用土封頂。在２０－２５度條件下，１個月左右，即長好蜜環菌菌索。這時可將菌棒、菌枝挖出，用作伴栽天麻和專一培養蜜環菌子實體食用。
（三）蜜環菌的利用
常食蜜環菌於實體（菇），能治療夜盲症，促進眼明，還能醫治人體面板乾燥等症。