平板劃線法是開始劃線的地方菌種多，因為劃線結束時的目的是得到單菌落。
【概念】
平板劃線分離法是指把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環在平板培養基表面透過分區劃線稀釋而得到較多獨立分佈的單個細胞，經培養後生長繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當作待分離微生物的純種。
【操作】
1．融化培養基：牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基放入水浴中加熱至融化。
2．倒平板：待培養基冷卻至50℃左右，按無菌操作法倒2只平板(每皿約15m1)，平置，待凝固。
倒平板的方法：右手持盛培養基的試管或三角瓶置火焰旁邊，用左手將試管塞或瓶塞輕輕地撥出，試管或瓶口保持對著火焰；然後用右手手掌邊緣或小指與無名指夾住管(瓶)塞(也可將試管塞或瓶塞放在左手邊緣或小指與無名指之間夾住。如果試管內或三角瓶內的培養基一次用完，管塞或瓶塞則不必夾在手中)。左手拿培養皿並將皿蓋在火焰附近開啟一縫，迅速例入培養基約15m1，加蓋後輕輕搖動培養皿，使培養基均勻分佈在培養皿底部，然後平置於桌面上，待凝後即為平板。
3．作分割槽標記在皿底將整個平板劃分成A、B、C、D四個面積不等的區域。各區之間的交角應為120℃左右（平板轉動一定角度約60℃），以便充分利用整個平板的面積，而且採用這種分割槽法可使D區與A區劃出的線條相平行，並可避免此兩區線條相接觸。
4．劃線操作
(1) 挑取他含菌樣品：選用平整、圓滑的接種環，按無菌操作法挑取少量菌種。
(2) 劃A區：將平板倒置於煤氣（酒精）燈旁,左手拿出皿底並儘量使平板垂直於桌面，有培養基一面向著煤氣燈(這時皿蓋朝上，仍留在煤氣燈旁)，右手拿接種環先在A區劃3—4條連續的平行線(線條多少應依挑菌量的多少面定)。劃完A區後應立即燒掉環上的殘菌，以免因菌過多而影響後面各區的分離效果。在燒接種環時，左手持皿底並將其覆蓋在皿蓋上方(不要放入皿蓋內)，以防止雜菌的汙染。
(3) 劃其他區：將燒去殘菌後的接種環在平板培養基邊緣冷卻一下，並使B區轉到上方，接種環透過A區(菌源區)將菌帶到B區，隨即劃數條緻密的平行線。再從B區作C區的劃線。最後經C區作D區的劃線，D區的線條應與A區平行，但劃D區時切勿重新接觸A、B區，以免極該兩區中濃密的菌液帶到D區，影響單菌落的形成。隨即將皿底放入皿蓋中。燒去接種環上的殘菌。
5．恆溫培養：將劃線平板倒置，於37℃（或28℃）培養，24hr後觀察。
平板劃線法是開始劃線的地方菌種多，因為劃線結束時的目的是得到單菌落。
【概念】
平板劃線分離法是指把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環在平板培養基表面透過分區劃線稀釋而得到較多獨立分佈的單個細胞，經培養後生長繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當作待分離微生物的純種。
【操作】
1．融化培養基：牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基放入水浴中加熱至融化。
2．倒平板：待培養基冷卻至50℃左右，按無菌操作法倒2只平板(每皿約15m1)，平置，待凝固。
倒平板的方法：右手持盛培養基的試管或三角瓶置火焰旁邊，用左手將試管塞或瓶塞輕輕地撥出，試管或瓶口保持對著火焰；然後用右手手掌邊緣或小指與無名指夾住管(瓶)塞(也可將試管塞或瓶塞放在左手邊緣或小指與無名指之間夾住。如果試管內或三角瓶內的培養基一次用完，管塞或瓶塞則不必夾在手中)。左手拿培養皿並將皿蓋在火焰附近開啟一縫，迅速例入培養基約15m1，加蓋後輕輕搖動培養皿，使培養基均勻分佈在培養皿底部，然後平置於桌面上，待凝後即為平板。
3．作分割槽標記在皿底將整個平板劃分成A、B、C、D四個面積不等的區域。各區之間的交角應為120℃左右（平板轉動一定角度約60℃），以便充分利用整個平板的面積，而且採用這種分割槽法可使D區與A區劃出的線條相平行，並可避免此兩區線條相接觸。
4．劃線操作
(1) 挑取他含菌樣品：選用平整、圓滑的接種環，按無菌操作法挑取少量菌種。
(2) 劃A區：將平板倒置於煤氣（酒精）燈旁,左手拿出皿底並儘量使平板垂直於桌面，有培養基一面向著煤氣燈(這時皿蓋朝上，仍留在煤氣燈旁)，右手拿接種環先在A區劃3—4條連續的平行線(線條多少應依挑菌量的多少面定)。劃完A區後應立即燒掉環上的殘菌，以免因菌過多而影響後面各區的分離效果。在燒接種環時，左手持皿底並將其覆蓋在皿蓋上方(不要放入皿蓋內)，以防止雜菌的汙染。
(3) 劃其他區：將燒去殘菌後的接種環在平板培養基邊緣冷卻一下，並使B區轉到上方，接種環透過A區(菌源區)將菌帶到B區，隨即劃數條緻密的平行線。再從B區作C區的劃線。最後經C區作D區的劃線，D區的線條應與A區平行，但劃D區時切勿重新接觸A、B區，以免極該兩區中濃密的菌液帶到D區，影響單菌落的形成。隨即將皿底放入皿蓋中。燒去接種環上的殘菌。
5．恆溫培養：將劃線平板倒置，於37℃（或28℃）培養，24hr後觀察。