緩衝溶液（英文：buffer solution）是一種能在加入少量酸或鹼和水時大大降低pH變動幅度的溶液。pH緩衝系統對維持生物的正常pH值和正常生理環境起到重要作用。多數細胞僅能在很窄的pH範圍內進行活動，而且需要有緩衝體系來抵抗在代謝過程中出現的pH變化。在生物體中有三種主要的pH緩衝體系，它們是蛋白質緩衝系統、重碳酸鹽緩衝系統以及磷酸鹽緩衝系統。每種緩衝體系所佔的分量在各類細胞和器官中是不同的。在生化研究工作中，常常需要使用緩衝溶液來維持實驗體系的酸鹼度。研究工作的溶液體系pH值的變化往往直接影響到研究工作的成效。如果“提取酶”實驗體系的pH值變動或大幅度變動，酶活性就會下降甚至完全喪失。所以配製緩衝溶液是一個不可或缺的關鍵步驟。常用作緩衝溶液的酸類由弱酸及其共軛酸鹽組合成的溶液具有緩衝作用。生化實驗室常用的緩衝系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tris（三羥甲基氨基甲烷）等系統，生化實驗或研究工作中要慎重地選擇緩衝體系，因為有時影響實驗結果的因素並不是緩衝液的pH值，而是緩衝液中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥甲基甲烷等緩衝劑都可能產生不需要的化學反應。硼酸鹽：硼酸鹽與許多化合物形成複鹽、如蔗糖。檸檬酸鹽：檸檬酸鹽離子容易與鈣結合，所以存在有鈣離子的情況下不能使用。磷酸鹽：在有些實驗，它是酶的抑止劑或甚至是一個代謝物，重金屬易以磷酸鹽的形式從溶液中沉澱出來。而且它在pH7.5以上時緩衝能力很小。三羥甲基氨基甲烷：它可以和重金屬一起作用，但在有些系統中也起抑制作用。其主要缺點時溫度效應。這點往往被忽視，在室溫pH是7.8的Tris緩衝液，4℃時是8.4，37℃時是7.4，因此，4℃配製的緩衝液在37℃進行測量時，其氫離子濃度就增加了10倍。在pH7.5以下，其緩衝能力極為不理想。緩衝體系由1、弱酸和它的鹽（如HAc---NaAc）2、弱鹼和它的鹽（NH3.H2O---NH4Cl）3、多元弱酸的酸式鹽及其對應的次級鹽（如NaH2PO4---Na2HPO4）的水溶液組成。設緩衝系統的弱酸的電離常數為Ka（平衡常數），平衡時弱酸的濃度為[酸]，弱酸鹽的濃度為[鹽]，則由弱酸的電離平衡式可得下式：[H+] = Ka {[弱酸]/[共軛鹼]}pH = pKa + lg {[共軛鹼]/[弱酸]}這就是Henderson-Hasselbach 等式。如果[弱酸] = [共軛鹼]，則pH = pKa根據此式可得出下列幾點結論：1 緩衝液的pH值與該酸的電離平衡常數Ka及鹽和酸的濃度有關。弱酸的pKa值衡定，但酸和鹽的比例不同時，就會得到不同的pH值。酸和鹽濃度相等時，溶液的pH值與PKa值相同。2 酸和鹽濃度等比例增減時，溶液的pH值不變。3 酸和鹽濃度相等時，緩衝液的緩衝效率為最高，比例相差越大，緩衝效率越低，緩衝液的一般有效緩衝範圍為PKa±1pH。