石蠟切片操作步驟:
1、取材
2、固定
3、脫水:30%--50%---70%(每步60分鐘)---85%---95%--100%---100%(每步30鍾)。
4、透明:轉入1/2二甲苯+1/2無水酒精混合液20ml透明1h,純二甲苯20ml透明1h,再用純二甲苯20ml透明40min,並回收各液。
5、浸蠟:(1)將材料分別放入25%、50%、75%的石蠟-二甲苯溶液中,每級30分鐘。該過程在高於石蠟熔點3℃的溫箱中進行;(2)將材料放入溶解的純蠟中,時間為30分鐘,該過程再重複兩次。在高於石蠟熔點3℃的溫箱中進行。
6、包埋(1)將溶解好的石蠟在加入預先摺好的紙船中,石蠟溶解後應過濾後使用,以免含雜質影響切片;(2)材料放入紙船,並擺好在蠟中的位置,如果包埋的組織塊較多,應進行編號;(3)將紙船放置在冷水上加速冷卻過程。
7、切片(1)修整:用刀片修成方形或長方形蠟塊;(2)以少許熱蠟液,將蠟塊底部粘附於小木塊上,以少許石蠟融化在蠟塊邊緣,加強粘附的強度;(3)木塊粘附於切片機上,調整切片機,使蠟塊切面與切片刀刃平行;(4)切成連續的蠟帶,切片刀的銳利度、蠟塊的硬度都會影響切片質量,可用熱水或冷水適當改變石蠟的硬度,也可在冰箱中放置一段時間;(5)分割蠟帶,分開的蠟片放在45℃溫水上,使蠟片展開。
8、粘片與烤片(1)可用粘片劑防止蠟片滑脫,但粘附劑通常容易被染色而使切片背景有顏色,影響觀察,實驗表明,載玻片洗的足夠乾淨,一般不會滑片;(2)用載玻片撈取展開後的蠟片,調整蠟片的位置使位於載玻片中央,自然乾燥。
9、脫蠟與醇化(1)將切片放入純二甲苯溶液中10分鐘,使石蠟完全溶解,共2次;(2)溶去石蠟的切片依次放入75%、50%、25%二甲苯-乙醇溶液中,每級10分鐘;(3)再將切片依次放入100%、95%、90%、80%、70%、60%、50%的乙醇溶液中進行醇化,每級10分鐘。
10、染色(1)將切片放入番紅染液中30分鐘,番紅染色後,將切片依次放入50%、60%、70%、80%的乙醇溶液中分級洗脫,每級10分鐘;(2)洗脫後的切片放入固綠染液中染色1分鐘;
11、脫水、透明與封片(1)染色後的切片依次放入90%、90%、95%、100%乙醇溶液中分級洗脫,每級10分鐘;(2)洗脫後的切片依次放入25%、50%、75%、100%、100%二甲苯溶液中透明,每級10分鐘,出現渾濁表示脫水不徹底,需重來;(3)滴1-2滴中性樹膠,將潔淨的蓋玻片傾斜放下,封片,鏡檢,選擇好的貼上標籤,性切片製作完成。
石蠟切片操作步驟:
1、取材
2、固定
3、脫水:30%--50%---70%(每步60分鐘)---85%---95%--100%---100%(每步30鍾)。
4、透明:轉入1/2二甲苯+1/2無水酒精混合液20ml透明1h,純二甲苯20ml透明1h,再用純二甲苯20ml透明40min,並回收各液。
5、浸蠟:(1)將材料分別放入25%、50%、75%的石蠟-二甲苯溶液中,每級30分鐘。該過程在高於石蠟熔點3℃的溫箱中進行;(2)將材料放入溶解的純蠟中,時間為30分鐘,該過程再重複兩次。在高於石蠟熔點3℃的溫箱中進行。
6、包埋(1)將溶解好的石蠟在加入預先摺好的紙船中,石蠟溶解後應過濾後使用,以免含雜質影響切片;(2)材料放入紙船,並擺好在蠟中的位置,如果包埋的組織塊較多,應進行編號;(3)將紙船放置在冷水上加速冷卻過程。
7、切片(1)修整:用刀片修成方形或長方形蠟塊;(2)以少許熱蠟液,將蠟塊底部粘附於小木塊上,以少許石蠟融化在蠟塊邊緣,加強粘附的強度;(3)木塊粘附於切片機上,調整切片機,使蠟塊切面與切片刀刃平行;(4)切成連續的蠟帶,切片刀的銳利度、蠟塊的硬度都會影響切片質量,可用熱水或冷水適當改變石蠟的硬度,也可在冰箱中放置一段時間;(5)分割蠟帶,分開的蠟片放在45℃溫水上,使蠟片展開。
8、粘片與烤片(1)可用粘片劑防止蠟片滑脫,但粘附劑通常容易被染色而使切片背景有顏色,影響觀察,實驗表明,載玻片洗的足夠乾淨,一般不會滑片;(2)用載玻片撈取展開後的蠟片,調整蠟片的位置使位於載玻片中央,自然乾燥。
9、脫蠟與醇化(1)將切片放入純二甲苯溶液中10分鐘,使石蠟完全溶解,共2次;(2)溶去石蠟的切片依次放入75%、50%、25%二甲苯-乙醇溶液中,每級10分鐘;(3)再將切片依次放入100%、95%、90%、80%、70%、60%、50%的乙醇溶液中進行醇化,每級10分鐘。
10、染色(1)將切片放入番紅染液中30分鐘,番紅染色後,將切片依次放入50%、60%、70%、80%的乙醇溶液中分級洗脫,每級10分鐘;(2)洗脫後的切片放入固綠染液中染色1分鐘;
11、脫水、透明與封片(1)染色後的切片依次放入90%、90%、95%、100%乙醇溶液中分級洗脫,每級10分鐘;(2)洗脫後的切片依次放入25%、50%、75%、100%、100%二甲苯溶液中透明,每級10分鐘,出現渾濁表示脫水不徹底,需重來;(3)滴1-2滴中性樹膠,將潔淨的蓋玻片傾斜放下,封片,鏡檢,選擇好的貼上標籤,性切片製作完成。