①目的基因的獲得。

從細菌或動植物細胞中取出染色體的DNA，用內切酶將之切成若干片段，從中鑑定出目的基因。另一種方法是從細胞中分離到信使核糖核酸核(mRNA)用反轉錄酶的作用獲得該基因的互補DNA(cDNA)。如果預先知道某種蛋白質的氨基酸順序，可以破譯它的遺傳密碼，用DNA合成的方法獲得基因。②運載體的選擇。運載體一般為質粒，是細菌中染色體以外的DNA。但它不是正常的成分，即沒有質粒也完全可以正常生長。質粒是環狀的DNA，能自主複製，有若干內切酶切口和某些抗生素的抗藥性基因。可以作為轉基因的載體。③內切酶切割。將目的基因與質粒DNA如pBR322質粒，用相同的內切酶分別進行切割，結果它們都會形成相同的切口。④連線酶連線。DNA連線酶，常用的有T4。在三磷酸腺苷(ATP)及鎂離子存在的條件下，T4連線酶能將切口相同的兩種DNA連線起來，形成一個插入目的基因的質粒，叫重組質粒。⑤宿主菌。宿主菌如大腸桿菌作為受體菌，需要培養到旺盛生長階段，叫感受態細胞。一般在液體培養基中，37℃振盪培養過夜即可。⑥重組DNA的轉化。將插入目的基因的質粒加入呈感受態的大腸桿菌中，同時加入適當的鈣鹽(Ca+2)，振盪培養。大腸桿菌將重組質粒吞入胞內。這個過程叫轉化。⑦轉化子的篩選。pBR322質粒的PstI酶切口處插入目的基因時，則會破壞了抗氨苄青黴素的基因。將轉化後的大腸桿菌單個菌落，挑取菌體分別接種於含氨苄青黴素及鏈黴素的培養基中。如在鏈黴素培養基上生長而在氨苄青黴素培養基上不能生長的菌落即為轉化子。