小鼠品系：不限
小鼠日齡：6周齡以上適合兩步灌流法，6周齡以下適合組織塊剪碎法。
兩步灌流法：
1.小鼠按80mg/kg的劑量腹腔注射，待小鼠進入深度麻醉狀態後迅速將其固定於解剖板上，於超淨臺中解剖，暴露肝臟。
2.沿門靜脈插管固定，灌流前灌流液20ml，流速3-5ml/min。待肝臟完全膨脹，剪斷下腔靜脈。
3.前灌流液灌流結束後，灌流5ml緩衝液後灌流後灌流液30ml，3-5ml/min。
4.取下肝臟，使用基礎培養基沖洗肝臟表面1次。剪碎肝臟，加入20ml基礎培養基，輕輕吹打，先後過濾80目、200目細胞篩，收集濾液，600rpm，離心5min。
5.收集沉澱，加入20ml基礎培養基重懸細胞，600rpm，離心5min。
6.收集沉澱，加入適量完全培養基+10%FBS重懸細胞，臺盼藍染色計數，以5×105/孔轉移細胞入6孔細胞培養板生長。
7.隔天換液，使用完全培養基+5%FBS培養細胞，隔天換液。
組織塊剪碎法：
1.斷頭處死成年小鼠，充分放血後迅速無菌取出肝臟組織，置於緩衝液中；
2.首先將肝組織剪成5mm邊長的組織塊，使用緩衝液洗滌2-3遍，然後進一步將肝組織剪碎成1mm3的組織小塊，使用緩衝液沖洗直至上清澄清；
3.組織塊轉移至50ml離心管內，加入10ml消化液，37%，靜置消化1h，間隔15min搖動1次；
4.消化完全後使用巴氏滴管反覆吹打消化產物30次，消化物分別過80目、200目細胞篩，收集濾液；
5.1000rpm，室溫離心8min，收集細胞，使用基礎培養基重懸細胞；
6.600rpm，離心5min，重複離心純化2次，細胞經臺盼藍染色，計數，按1x106/25cm2的細胞數分瓶，使用完全培養基+20%FBS進行培養。
7.18h後換液，以後每天換液。
試劑配方：
前灌流液：
含0.02%EDTA，50U/ml肝素鈉的無Ca2+，Mg2+的HBSS
緩衝液：
含Ca2+，Mg2+的HBSS
後灌流液：
含0.1%Ⅳ型膠原酶的HBSS（含Ca2+，Mg2+）
基礎培養基：
高糖DMEM+10%FBS
小鼠品系：不限
小鼠日齡：6周齡以上適合兩步灌流法，6周齡以下適合組織塊剪碎法。
兩步灌流法：
1.小鼠按80mg/kg的劑量腹腔注射，待小鼠進入深度麻醉狀態後迅速將其固定於解剖板上，於超淨臺中解剖，暴露肝臟。
2.沿門靜脈插管固定，灌流前灌流液20ml，流速3-5ml/min。待肝臟完全膨脹，剪斷下腔靜脈。
3.前灌流液灌流結束後，灌流5ml緩衝液後灌流後灌流液30ml，3-5ml/min。
4.取下肝臟，使用基礎培養基沖洗肝臟表面1次。剪碎肝臟，加入20ml基礎培養基，輕輕吹打，先後過濾80目、200目細胞篩，收集濾液，600rpm，離心5min。
5.收集沉澱，加入20ml基礎培養基重懸細胞，600rpm，離心5min。
6.收集沉澱，加入適量完全培養基+10%FBS重懸細胞，臺盼藍染色計數，以5×105/孔轉移細胞入6孔細胞培養板生長。
7.隔天換液，使用完全培養基+5%FBS培養細胞，隔天換液。
組織塊剪碎法：
1.斷頭處死成年小鼠，充分放血後迅速無菌取出肝臟組織，置於緩衝液中；
2.首先將肝組織剪成5mm邊長的組織塊，使用緩衝液洗滌2-3遍，然後進一步將肝組織剪碎成1mm3的組織小塊，使用緩衝液沖洗直至上清澄清；
3.組織塊轉移至50ml離心管內，加入10ml消化液，37%，靜置消化1h，間隔15min搖動1次；
4.消化完全後使用巴氏滴管反覆吹打消化產物30次，消化物分別過80目、200目細胞篩，收集濾液；
5.1000rpm，室溫離心8min，收集細胞，使用基礎培養基重懸細胞；
6.600rpm，離心5min，重複離心純化2次，細胞經臺盼藍染色，計數，按1x106/25cm2的細胞數分瓶，使用完全培養基+20%FBS進行培養。
7.18h後換液，以後每天換液。
試劑配方：
前灌流液：
含0.02%EDTA，50U/ml肝素鈉的無Ca2+，Mg2+的HBSS
緩衝液：
含Ca2+，Mg2+的HBSS
後灌流液：
含0.1%Ⅳ型膠原酶的HBSS（含Ca2+，Mg2+）
基礎培養基：
高糖DMEM+10%FBS