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  • 1 # 愛健身的影子

    PCR是什麼?PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖複製。目前常用的技術,可以將一段基因複製為原來的一百億至一千億倍。根據DNA擴增的目的和檢測的標準,可以將PCR儀分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR儀,實時熒光定量PCR儀四類。

    利用升溫使DNA變性,在聚合酶的作用下使單鏈複製成雙鏈,進而達到基因複製的目的。

    分別是1. Denaturation 2. Annealing of primers,3. Extension of primers。 所謂 Denaturing乃是將DNA加熱(至90~95℃)變性, 將雙股的DNA加熱後轉為單股DNA以做為複製的模板. 而Annealing 則是令 Primers於一定的溫度下(冷卻至55~60℃)附著於模板DNA兩端。 最後在DNA聚合酶e.g. Taq-polymerase 的作用下(加熱至70~75℃)進行引物的延長 Extension of primers及另一股的合成。

    PCR的最早設想核酸研究已有100多年的歷史,二十世紀60年代末、70年代初人們致力於研究基因的體外分離技術,Korana於1971年最早提出核酸體外擴增的設想:“經過DNA變性,與合適的引物雜交,用DNA聚合酶延伸引物,並不斷重複該過程便可克隆tRNA基因”。

    把一次性PCR擴增可以設定一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度),通常有12種溫度梯度,這樣的儀器就叫梯度PCR儀。因為被擴增的不同DNA片段,其最適退火溫度是不同的,透過設定一系列的梯度退火溫度進行擴增,從而一次性PCR擴增,就可以篩選出表達量高的最適退火溫度,進行有效的擴增。主要用於研究未知DNA退火溫度的擴增,這樣節約成本的同時也節約了時間。主要用於科研,教學機構。梯度PCR儀,在不設定梯度的情況下也可以做普通PCR擴增。具有雙槽梯度的不多,領成具備此功能。

    PCR技術神奇就神奇在以下幾個特點上:一是被擴增的DNA所需量極小,理論上講一個分子就可以用於擴增了;二是擴增效率高,目的基因的量成指數形式擴增,幾個小時就擴增1000萬倍以上。現在PCR技術已經被廣泛地應用於生命科學研究、食品衛生、醫療、法醫及環境監測等諸多方面,真不愧是“獲得諾貝爾獎”的好技術!(此文章為引用)

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