DNA聚合酶主要連線DNA片段與單個脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵，在DNA複製中起做用;

DNA連線酶主要是連線DNA片段之間的磷酸二酯鍵，起連線作用.在基因工程中起作用，同時DNA連線酶在DNA複製中也起作用，比如崗琦片段的連線!

DNA連線酶與DNA聚合酶有形成方式、模板和用途三個區別：

1、形成方式不同

DNA連線酶是在兩個DNA片段之間形成磷酸二酯鍵，不是在單個核苷酸與DNA片段之間形成磷酸二酯鍵。DNA連線酶都不能催化兩條遊離的DNA鏈相連線。

DNA聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯鍵。dna聚合酶起到催化劑的作用，催化原來的dna進行復制，然後將原來的dna和複製以後的dna進行模板配對後，連線聚合在一起，就可以形成新的dna鏈。

2、模板不同

DNA連線酶不需要模板，因為DNA連線酶是將DNA雙鏈上的兩個缺口同時連線起來。用DNA連線酶連線具互補粘性末端的DNA片段或是用T4DNA連線酶直接將平末端的DNA片段連線起來。

DNA聚合酶是以一條DNA鏈為模板，將單個核苷酸透過磷酸二酯鍵形成一條與模板鏈互補的DNA鏈。DNA聚合酶的結構是三磷酸腺苷。

3、用途不同

DNA連線酶主要用於基因工程，將由限制性核酸內切酶“剪”出的粘性末端重新組合，故也稱“基因針線”。如基因工程中，大腸桿菌連線酶連線黏性末端，T4連線酶既可連線黏性末端，又可連線平末端。

DNA聚合酶在DNA複製中起做用，主要是連線DNA片段與單個脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵。