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  • 1 # 百問百答百科

      離子交換色譜法(HPLC、LPLC):基於電荷差異進行分析。葡萄糖與血紅蛋白(Hb)的β鏈N末端纈氨酸(Val)結合降低了等電點,導致糖化Hb帶的正電荷比未糖化Hb的少,與樹脂的附著力小,可以分別用不同的離子濃度的緩衝液在不同的時間將Hb從陽離子交換柱中洗脫下來,再根據每個峰值下的面積來計算HbA1c佔總Hb的比例。

      精密度高,有些產品CV可以小於1%

      非特異性問題存在,有些產品仍會受變異Hb 、氨基甲醯化和乙醯化Hb影響

      可採用高通量的高效液相色譜(HPLC)和低壓系統(LPLC)方法

      美國糖化血紅蛋白標準化計劃(NGSP)的參考方法

      電泳法(Elec):研製於上世紀80年代,與離子交換層析法一樣也是基於糖化和非糖化Hb所帶的電荷不同進行分離。該方法操作簡易,不受溫度、pH影響,在當時相對其他方法來說精密度較高,但是需成批樣本分析,分析時間較長,臨床上現已較少使用。

      親和色譜法(HPLC-af chr):基於結構不同進行分析。利用對m-氨苯基硼酸依賴的糖化血紅蛋白1,2-順式二醇基團和固定的硼酸陰離子的特殊反應而設計的。與Hbα和β鏈的纈氨酸(Val)和賴氨酸(?-Lys)連線的葡萄糖均會與硼酸結合形成可逆的複合物,未糖化Hb先被洗脫後,再用山梨醇分離複合物,並將全部糖化Hb洗脫出來。

      檢測結果是“總”糖化Hb,透過校準其結果與HPLC有良好的相關性

      不受溫度、尿毒症、HbF或Schiff base的干擾

      室內精密度較高,實驗室間的結果存在差異

      免疫法(Im tur):抗原抗體反應原理。單克隆抗體技術的運用使該方法有了快速發展,最早是英國Dako公司研製出識別葡萄糖附著在Hb的β鏈N末端8個氨基酸抗原位點的單克隆抗體,用酶免疫原理(EIA)進行檢測。

      具有較好的精密度、與其他方法有較好的相關性

      可以在自動生化儀上用比濁法進行定量測定

      抗原與IFCC一級參考物質β鏈N末端6個氨基酸肽端相似

      如果用6個氨基酸的為抗原,當Hb發生第6位氨基酸變異[HbS(β6glu→val)和HbC(β6glu→lys)]時將不會被識別,可導致廠家間的檢測結果存在著偏倚

      各廠家產品的單抗針對的抗原決定簇不同、親和力不同等因素也會影響結果的可比性

      酶法(En):近幾年才推出在自動生化儀上測定的生化反應方法。其原理是在蛋白酶的作用下,切斷HbA1c的?鏈N末端的糖化二肽,糖化二肽在果糖基肽氧化酶的作用下生成過氧化氫,在過氧化物酶的存在下與顯色劑產生顯色反應,透過測定吸光度求出HbA1c的百分濃度。該方法精密度好,同HPLC和免疫法均有較好的相關性。

      快速檢驗(POCT:Mic chr、Flu im)

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