分子所處的外界環境，如溫度、溶劑、pH、熒光熄燈滅劑等都會影響熒光效率，甚至影響分子結構及立體構象，從而影響熒光光譜和熒光強度。1、溫度溫度對於溶液的熒光強度有著顯著的影響。在一般情況下，隨著溫度的升高，熒光物質溶液的熒光效率和熒光強度將降低。這是因為，當溫度升高時，分子運動速度加快，分子間碰撞機率增加，使無輻射躍遷增加，從而降低了熒光效率。例如，熒光素鈉的乙醇溶液，在0℃以下，溫度每降低10℃，在熒光效率增加3％，在—80℃時，熒光效率φf為1。2、溶劑同一物質在不同溶劑中，其熒光光譜的位置和強度都有差別。一般情況下，熒光波長隨著溶劑極性的增大而長移，熒光強度也有增強。這是因為在極性溶劑中，π→π*躍遷需要的能量差ΔE小，而且躍遷機率增加，使紫外吸收和熒光波長均向長移，強度也增強。溶劑粘度減小時，可以增加分子間碰撞機會，使無輻射躍遷增加而熒光減弱。故熒光強度隨溶劑粘度的減小而減弱。由於溫度對溶劑的粘度有影響，一般式溫度上升，溶劑粘度變小，因此溫度上升熒光強度下降。3、pH的影響當熒光物質本身是弱酸或弱鹼時，溶液的pH對該熒光物質的熒光強度有較大的影響，這主要是因為弱酸弱鹼和它們的離子結構有所不同，在不同酸度中分子和離子間的平衡改變，因此熒光強度也有差異。在每一種熒光物質都有其適宜的發射熒光的存在形式，也就有相應的pH範圍，一保持熒光物質和溶劑之間的離解平衡。苯胺在pH為7~12的溶液中主要以分子形式存在，由於—NH2為提高熒光效率的取代基，故苯胺分子會發生藍色熒光。但在pH＜2和pH＞13的溶液中均以苯胺離子形式存在，故不能發射熒光。4.熒光熄滅劑熒光熄滅又稱熒光猝滅，是指熒光物質分子與溶劑分子或其它溶質分子相互作用引起熒光強度降低的現象。熒光熄滅劑可以促進這種現象的發生。5.散射光散射光對熒光測定有干擾，尤其是波長比入射光波長更長的拉曼光，因其波長與熒光波長接近，對熒光測定的干擾更大，必須採取措施消除。