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  • 1 # 迷彩坨坨

    OGD模型即糖氧剝奪(OGD)離體腦缺血模型糖氧剝奪(Oxygen and glucose deprivation,OGD)模型:此法可模擬在體腦缺血模型,又稱離體缺血模型。

    我們擁有美國公司生產的三氣培養箱,透過直接通入N2的方式精確控制培養箱內CO2和O2濃度,同時剝奪神經元培養基中的糖,從而造成培養神經元缺氧缺糖的環境,模擬在體腦缺血的情況。

    實驗如下目的 :探討一種簡便、穩定、可重複的大鼠成年神經幹細胞體外氧糖剝奪/復氧模型的製備方法 。方法 :以來自於成年Fisher344大鼠的海馬神經幹細胞係為研究物件,以無血清培養基培養並傳代,並用nestin和DAPI免疫熒光雙染確認其生物學特性。

    將三氣培養箱氧氣濃度調至1%以製備缺氧環境,將培養基換為不含葡萄糖的Earle′s平衡鹽溶液,分別缺氧缺糖2h、4h、6h、8h、10h後取出細胞。

    恢復正常條件繼續培養24 h後倒置顯微鏡下觀察細胞形態學變化,CCK-8比色法檢測細胞存活率,流式細胞術檢測細胞凋亡率。同時設定常氧常糖的正常對照組。結果 :與正常對照組相比,缺氧缺糖2h組細胞吸光度值明顯升高,細胞存活率有一定的增長,但差異無統計學意義(P>0.05)。

    隨著缺氧缺糖時間延長,神經幹細胞形態學損傷逐漸加重,細胞吸光度值逐漸下降,缺氧缺糖6h後與正常對照組比較差異有統計學意義(P<0.05)。

    缺氧缺糖6h起細胞存活率均較正常對照組明顯下降,比較差異有統計學意義(P<0.05);神經幹細胞凋亡率逐漸增高,且均明顯高於正常對照組,差異有統計學意義(P<0.05),其中缺氧缺糖6h時細胞的凋亡率已超過50%。結論 :利用三氣培養箱物理缺氧方法 可成功建立一種簡便、有效的神經幹細胞體外氧糖剝奪/復氧模型。

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