020答：

構建一個shRNA表達載體，將此載體用電穿孔的方法注射入小鼠胚胎幹細胞，shRNA在小鼠內發揮作用，沉默目的基因。什麼是RNA干擾？RNA干擾（RNA interference,RNAi），又稱轉錄後基因沉默，是指將特異性同源雙鏈RNA匯入到細胞內，使目的基因的不表達或表達水平下降。什麼是shRAN？shRNA"是short hairpin RNA的縮寫，即，"短髮夾RNA"。shRNA 包括兩個短反向互補序列，中間由一頂端環（loop)序列分隔的，組成髮夾結構，通常由細 胞內源的RNA聚合酶III (RNA polymerase III)啟動子控制轉錄，shRNA序列的末端連線 5-6個T作為RNA聚合酶III的轉錄終止子。shRNA也可以由其它RNA聚合酶的啟動子轉錄產生。各名詞的介紹：

miRNA：（microRNA)是一類由內源基因編碼的長度約20-24個 核苷酸的非編碼單鏈RNA分子，在動植物中參與對大量基因的表達調控。到目前為止，在動 植物以及病毒中已經發現四千多種miRNA分子。大多數miRNA基因以單複製、多複製或基 因簇（cluster)的形式存在於基因組中。每種miRNA可以調控多個靶基因，而幾種miRNA 也可以共同參與調節同一基因，組成複雜的調節網路。據推測，miRNA調節著人類一半以上 基因的表達。miRNA存在多種形式，最原始的是pri-miRNA ;pri-miRNA經過Drosha加工後， 成為pre-miRNA，即miRNA前體，長度大約為50-90個核苷酸；pre-miRNA再經過Dicer酶酶 切後，成為長約20-24個核苷酸的成熟miRNA。miRNA主要透過抑制翻譯和加速mRNA的脫 腺苷酸化抑制靶基因表達，其機制有別於siRNA介導的mRNA降解。

siRNA：(Small interfering RNA, siRNA)是指一種小 RNA 分子 (約21-25個核苷酸），可由Dicer (RNA酶III家族中對雙鏈RNA具有特異性的酶）從其前體 (比如dsRNA、shRNA等）加工而成，也可由化學方法合成或由其它蛋白加工產生。siRNA是 siRISC的主要成員，激發與之序列互補的目標RNA被迅速切割降解，導致目標基因的沉默， 因此成為RNAi中的關鍵功能分子。

RNAi：（RNA interference, RNA干擾）是指在進化過程中高 度保守的、由雙鏈RNA(dsRNA)誘發的、高效特異性降解具有互補配對序列的RNA的現象。 由於使用RNAi技術可以特異性關閉特定基因的表達，所以該技術已被廣泛用於探索基因 功能和傳染性疾病及腫瘤的基因治療等領域。dsRNA介導的RNAi現象在真菌、果蠅、擬南 芥、錐蟲、水螅、渦蟲、斑馬魚等多種真核生物中均有發現，而且在植物中的轉錄後基因沉默(posttranscriptional gene silencing，PTGS)、共抑制（cosuppression)及 RNA 介導的病 毒抗性、真菌的抑制（quelling)現象也均屬於RNAi在不同物種的表現形式。

如何產生小干擾RNA？

在活體中產生"小干擾RNA"(siRNA)的一種辦法是，將siRNA序列作為"短髮夾"的 一部分克隆進質粒載體中。當送入動物體內時，該髮夾序列被表達出來，形成一個帶有頂端 環結構的"雙鏈RNA"（shRNA)，被細胞內的Dicer蛋白所識別和加工，產生有功能的siRNA。

shRNA的作用：

shRNA可以顯著增強Dicer依賴型的siRNA 表達前體一shRNA對靶基因的抑制效率，具有表達效果更強、抑制效率更高等優點。使用的shRNA載體的現有缺點：

效率不高。往往需要設計多個shRNA才能保證有1-2個shRNA能對靶基因達到70% 以上的抑制效果。

注入RNA編碼的蛋白質剪下與連線酶，就可以了，之後小鼠會得癌症死去。身上長滿腫瘤，就和美國吃了轉基因大豆的小鼠一樣。美國轉基因大豆不能吃。