植物組織中澱粉含量的測定
【原理】 澱粉是由葡萄糖殘基組成的多糖,在酸性條件下加熱使其水解成葡萄糖,然後在濃硫酸的作用下,使單糖脫水生成糠醛類化合物,利用苯酚或蒽酮試劑與糠醛化合物的顯色反應,即可進行比色測定。【儀器與用具】電子天平;容量瓶:100ml×4,50ml×2;漏斗;小試管若干支;電爐;刻度吸管0
【原理】
澱粉是由葡萄糖殘基組成的多糖,在酸性條件下加熱使其水解成葡萄糖,然後在濃硫酸的作用下,使單糖脫水生成糠醛類化合物,利用苯酚或蒽酮試劑與糠醛化合物的顯色反應,即可進行比色測定。
【儀器與用具】
電子天平;容量瓶:100ml×4,50ml×2;漏斗;小試管若干支;電爐;刻度吸管0.5ml×1,2.0ml×3,5ml×4;分光光度計;記號筆。
【試劑】
(1)濃硫酸(比重1.84);
(2)9.2mol/L HClO4;
(3)2%蒽酮試劑:同蒽酮法(或9%苯酚,同方法一);
(4)澱粉標準液:準確稱取100mg純澱粉,放入100ml容量瓶中,加60~70ml熱蒸餾水,放入沸水浴中煮沸0.5h,冷卻後加蒸餾水稀釋至刻度,則每ml含澱粉1mg,吸取此液5.0ml,加蒸餾水稀釋至50ml,即為每ml含澱粉100μg的標準液。
【方法】
1.標準曲線製作
取小試管11支從0~10編號,按表24-3加入溶液和蒸餾水。
以下步驟按苯酚法或蒽酮法均可,見方法一或方法二,繪製相應的標準曲線。
表24-3 各試管加入標準液和蒸餾水量
管 號
1~2
3~4
5~6
7~8
9~10
澱粉標準液(ml)
0.4
0.8
1.2
1.6
2.0
蒸 餾 水(ml)
澱粉含量(mg)
40
80
120
160
200
2.樣品提取
將提取可溶性糖以後的殘渣,移入50ml容量瓶中,加20ml熱蒸餾水,放入沸水浴中煮沸15min,再加入9.2mol/L高氯酸2ml提取15min,冷卻後,混勻,用濾紙過濾,並用蒸餾水定容(或以2500r/min離心10min)。
3.測定 可採用苯酚法或蒽酮顯色法測定。
按下式計算澱粉的含量。澱粉水解時,在單糖殘基上加了1分子水,因而計算時所得的糖量乘以0.9才為扣除加入水量後的實際澱粉含量。
澱粉含量(%)=
式中 C-標準曲線查得的澱粉含量(μg);
V-提取液總量(ml);
a-顯色時取液量(ml);
W-樣品重(g)。
注:澱粉水解完全度試驗 樣品測定中可同時作1份用於澱粉水解完全度檢驗的樣品,在酸解過濾後,將其殘渣加上2ml水,攪拌均勻,吸2滴於白瓷盤上,加2滴I2-KI溶液,顯微鏡下觀察,若出現紫藍色顆粒,證明水解不完全,其正式測試樣品需再加高氯酸水解,直至不出現藍紫色為止
植物組織中澱粉含量的測定
【原理】 澱粉是由葡萄糖殘基組成的多糖,在酸性條件下加熱使其水解成葡萄糖,然後在濃硫酸的作用下,使單糖脫水生成糠醛類化合物,利用苯酚或蒽酮試劑與糠醛化合物的顯色反應,即可進行比色測定。【儀器與用具】電子天平;容量瓶:100ml×4,50ml×2;漏斗;小試管若干支;電爐;刻度吸管0
【原理】
澱粉是由葡萄糖殘基組成的多糖,在酸性條件下加熱使其水解成葡萄糖,然後在濃硫酸的作用下,使單糖脫水生成糠醛類化合物,利用苯酚或蒽酮試劑與糠醛化合物的顯色反應,即可進行比色測定。
【儀器與用具】
電子天平;容量瓶:100ml×4,50ml×2;漏斗;小試管若干支;電爐;刻度吸管0.5ml×1,2.0ml×3,5ml×4;分光光度計;記號筆。
【試劑】
(1)濃硫酸(比重1.84);
(2)9.2mol/L HClO4;
(3)2%蒽酮試劑:同蒽酮法(或9%苯酚,同方法一);
(4)澱粉標準液:準確稱取100mg純澱粉,放入100ml容量瓶中,加60~70ml熱蒸餾水,放入沸水浴中煮沸0.5h,冷卻後加蒸餾水稀釋至刻度,則每ml含澱粉1mg,吸取此液5.0ml,加蒸餾水稀釋至50ml,即為每ml含澱粉100μg的標準液。
【方法】
1.標準曲線製作
取小試管11支從0~10編號,按表24-3加入溶液和蒸餾水。
以下步驟按苯酚法或蒽酮法均可,見方法一或方法二,繪製相應的標準曲線。
表24-3 各試管加入標準液和蒸餾水量
管 號
1~2
3~4
5~6
7~8
9~10
澱粉標準液(ml)
0.4
0.8
1.2
1.6
2.0
蒸 餾 水(ml)
2.0
1.6
1.2
0.8
0.4
澱粉含量(mg)
40
80
120
160
200
2.樣品提取
將提取可溶性糖以後的殘渣,移入50ml容量瓶中,加20ml熱蒸餾水,放入沸水浴中煮沸15min,再加入9.2mol/L高氯酸2ml提取15min,冷卻後,混勻,用濾紙過濾,並用蒸餾水定容(或以2500r/min離心10min)。
3.測定 可採用苯酚法或蒽酮顯色法測定。
按下式計算澱粉的含量。澱粉水解時,在單糖殘基上加了1分子水,因而計算時所得的糖量乘以0.9才為扣除加入水量後的實際澱粉含量。
澱粉含量(%)=
式中 C-標準曲線查得的澱粉含量(μg);
V-提取液總量(ml);
a-顯色時取液量(ml);
W-樣品重(g)。
注:澱粉水解完全度試驗 樣品測定中可同時作1份用於澱粉水解完全度檢驗的樣品,在酸解過濾後,將其殘渣加上2ml水,攪拌均勻,吸2滴於白瓷盤上,加2滴I2-KI溶液,顯微鏡下觀察,若出現紫藍色顆粒,證明水解不完全,其正式測試樣品需再加高氯酸水解,直至不出現藍紫色為止