1、加樣時槍頭不要碰壞孔壁,否則DNA帶型不整齊。大多情況下,加樣時不必更換槍頭,可在陰極槽中反覆吸打電泳緩衝液清洗,但對Southern 印跡轉移和需回收DNA時,應每個樣品使用新的槍頭,以避免樣品交叉汙染。
2、上樣緩衝液不僅提高樣品的密度,使樣品均勻沉到樣孔底,還使樣品帶色,便於上樣,估計電泳時間和判斷電泳位置。
3、EB是一種強烈誘變劑並有中度毒性,應戴手套操作,對於含有EB的溶液也不應直接倒下水道,用後妥善淨化處理:EB含量大於0.5μg/ml溶 液先用水將EB濃度稀釋至0.5μg/ml以下,每100ml溶液加入100mg活性碳,不時輕輕搖盪混勻,室溫放置1小時,濾紙過濾將活性碳與濾紙密封在塑膠袋中作為有害廢物丟棄。或用專用一次性染料清除袋(Gene有限公司)吸附過夜,再焚燒袋子即 可。
4、應在暗箱視窗觀察結果,避免紫外線操作者的損傷。
5、電泳過程中,EB向陰極移動(與DNA相反),延長電泳時間,EB會從凝膠中遷移出來,從而使小片段DNA難於檢測,可將凝膠浸在 0.5μg/ml EB溶液中重新染色後檢測。
6、加樣孔的加樣量依DNA樣品中片段的數量及大小而定,通常對0.5cm寬的加樣孔,DNA上樣量在0.1~0.5μg即可有良好的觀察效果。如 樣品為酶切產物(由大小不同的DNA片段組成),每孔加20~30μg DNA也不致明顯影響解析度。
7、小的凝膠——微型凝膠和中型凝膠的電泳一般比大的凝膠要快,常常用於快速分析。當選擇微型或中型凝膠裝置時要考慮凝膠槽盛裝緩衝液的體積,小膠 通常要在高壓下電泳(>10V/cm),所以選擇一個相對較大的緩衝液槽比較有利。
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詳細資料請參考:on
1、加樣時槍頭不要碰壞孔壁,否則DNA帶型不整齊。大多情況下,加樣時不必更換槍頭,可在陰極槽中反覆吸打電泳緩衝液清洗,但對Southern 印跡轉移和需回收DNA時,應每個樣品使用新的槍頭,以避免樣品交叉汙染。
2、上樣緩衝液不僅提高樣品的密度,使樣品均勻沉到樣孔底,還使樣品帶色,便於上樣,估計電泳時間和判斷電泳位置。
3、EB是一種強烈誘變劑並有中度毒性,應戴手套操作,對於含有EB的溶液也不應直接倒下水道,用後妥善淨化處理:EB含量大於0.5μg/ml溶 液先用水將EB濃度稀釋至0.5μg/ml以下,每100ml溶液加入100mg活性碳,不時輕輕搖盪混勻,室溫放置1小時,濾紙過濾將活性碳與濾紙密封在塑膠袋中作為有害廢物丟棄。或用專用一次性染料清除袋(Gene有限公司)吸附過夜,再焚燒袋子即 可。
4、應在暗箱視窗觀察結果,避免紫外線操作者的損傷。
5、電泳過程中,EB向陰極移動(與DNA相反),延長電泳時間,EB會從凝膠中遷移出來,從而使小片段DNA難於檢測,可將凝膠浸在 0.5μg/ml EB溶液中重新染色後檢測。
6、加樣孔的加樣量依DNA樣品中片段的數量及大小而定,通常對0.5cm寬的加樣孔,DNA上樣量在0.1~0.5μg即可有良好的觀察效果。如 樣品為酶切產物(由大小不同的DNA片段組成),每孔加20~30μg DNA也不致明顯影響解析度。
7、小的凝膠——微型凝膠和中型凝膠的電泳一般比大的凝膠要快,常常用於快速分析。當選擇微型或中型凝膠裝置時要考慮凝膠槽盛裝緩衝液的體積,小膠 通常要在高壓下電泳(>10V/cm),所以選擇一個相對較大的緩衝液槽比較有利。
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