單克隆抗體製備的基本流程

（1）免疫動物

免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的過程。一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。抗原透過血液迴圈或淋巴迴圈進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，並分化成為致敏B淋巴細胞。

（2）細胞融合

採用眼球摘除放血法處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平皿內擠壓研磨，製備脾細胞懸液。將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合，並加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發生融合，形成雜交瘤細胞。

（3）選擇性培養

選擇性培養的目的是篩選融合的雜交瘤細胞，一般採用HAT選擇性培養基。在HAT培養基中，未融合的骨髓瘤細胞因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶，不能利用補救途徑合成DNA而死亡。未融合的淋巴細胞雖具有次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶，但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡。只有融合的雜交瘤細胞由於從脾細胞獲得了次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶，並具有骨髓瘤細胞能增殖的特性，因此能在HAT培養基中存活和增殖。

（4）雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化

在HAT培養基中生長的雜交瘤細胞，只有少數是分泌預定單克隆抗體的細胞，因此，必須進行篩選和克隆化。通常採用有限稀釋法進行雜交瘤細胞的克隆化培養。採用免疫學方法，篩選出能產生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細胞，並進行克隆擴增。經過鑑定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白型別、亞類、特異性、親和力、識別抗原的表位及其分子量後，及時進行凍存。