目的克隆滇重樓甾體皂苷生物合成途徑中的關鍵酶鯊烯環氧酶(SE)基因、3-羥基-3-甲基戊二酸單醯輔酶A還原酶(HMGR)基因和法呢基焦磷酸合酶(FPS)基因並進行原核表達。並用Real-time PCR法檢測c DNA樣本中SE1基因、SE2基因、HMGR基因和FPS基因的相對含量。方法以昆明市梁王山採摘的滇重樓根莖為材料,提取其總RNA,再反轉錄為c DNA。以反轉錄得到的c DNA為模板,根據Hi Seq2500 sequencing platform得到的滇重樓轉錄組資料中的兩組SE基因、HMGR基因和FPS基因全長序列設計特異性引物,克隆SE基因、HMGR基因和FPS基因,再將克隆得到的基因片段轉入到p EASY-T1 Simple Cloning Vector中,經測序鑑定正確後,構建表達載體,利用Art Media protein Expression/Amp+培養基進行自動誘導表達,並用Real-time PCR法檢測c DNA樣本中SE1、SE2、HMGR和FPS基因相對含量。結果獲得了兩條滇重樓SE基因,將它們分別命名為SE1、SE2基因,全長分別為1932bp、1828bp。SE1的ORF長為1578bp,編碼525個氨基酸,SE2的ORF長為1548bp,編碼515個氨基酸。熒光定量PCR結果顯示SE1基因在莖和葉中的表達與SE2基因相比較具有顯著差異,SE1的表達在葉中最為顯著。獲得了一條滇重樓HMGR基因,全長1731bp,ORF為1593bp,編碼531個氨基酸。熒光定量PCR結果表明HMGR基因在根中的表達量高於莖和葉。獲得了一條滇重樓的FPS基因,全長為1206bp,並且包含完整的ORF,大小為1050bp,編碼350個氨基酸。熒光定量PCR結果顯示,FPS基因在葉中的表達量較高。測序結果表明,原核表達載體p EASY-E1-SE、p EASY-E1-HMGR和p EASY-E1-FPS構建成功。SDS-PAGE分析顯示,在BL21(DE3)表達感受態細胞中成功誘導表達了SE1、SE2、HMGR和FPS基因並獲得了相對應的四種融合蛋白。結論SE1基因和SE2基因在滇重樓中具有不同的表達模式,且可能在滇重樓次生代謝產物的合成中起著不同的作用。HMGR基因在根中的高表達以及FPS基因在葉中的高表達等結果,為滇重樓功能基因表達分析研究及人工調控滇重樓有效成分的生物合成奠定了基礎。