在基因工程中起到特定功能的酶的統稱。

可粗略的分為限制酶，連線酶，聚合酶和修飾酶四大類。其中，以限制性核酸內切酶和DNA連線酶在分子克隆中的作用最為突出。

限制酶：

生物體內能識別並切割特異的雙鏈DNA序列的一種內切核酸酶。它可以將外來的DNA切斷的酶，即能夠限制異源DNA的侵入並使之失去活力，但對自己的DNA卻無損害作用，這樣可以保護細胞原有的遺傳資訊。由於這種切割作用是在DNA分子內部進行的，故名限制性內切酶(簡稱限制酶)

連線酶：

它是一種封閉DNA鏈上缺口酶，藉助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA鏈的5"-PO4與另一DNA鏈的3"-OH生成磷酸二酯鍵。但這兩條鏈必須是與同一條互補鏈配對結合的(T4DNA連線酶除外)，而且必須是兩條緊鄰DNA鏈才能被DNA連線酶催化成磷酸二酯鍵。 　　連線酶有T4噬菌體DNA連線酶、T4噬菌體RNA連線酶、大腸埃希菌DNA連線酶等。DNA連線酶可連線平端，也連線粘端。

聚合酶：

又稱DNA聚合酶。系專司生物催化合成脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的一類酶的統稱。

核酸酶：

核酸酶有DNase、RNase、核酸酶S1等，可水解相應的DNA和RNA，核酸酶S1可降解單鏈DNA和RNA，用量增大也可降解雙鏈核酸。它可用於切去ds-cDNA合成中產生的髮夾環。

修飾酶：

體內有些酶可在其他酶的作用下，將酶的結構進行共價修飾，使該酶活性發生改變，這種調節稱為共價修飾調節(covalent modification regulation)，這類酶稱為修飾酶(prosessing enzyme)。