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  • 1 # dyulo39598

    原核生物的基因則可直接用限制酶從DNA切取。因為原核生物的基因是連續不間隔的,直接切取就可得到目的基因,再PCR擴增後就能得到大量目的基因。 原核生物基因分為編碼區與非編碼區。非編碼區上的基因決定某些性狀是否表達,表達多少次以及何時開始表達。所謂的編碼區就是能轉錄為相應的信使RNA,進而指導蛋白質的合成,也就是說能夠編碼蛋白質。非編碼區則相反,但是非編碼區對遺傳資訊的表達是必不可少的,因為在非編碼區上有調控遺傳資訊表達的核苷酸序列。非編碼區位於編碼區的上游及下游。在調控遺傳資訊表達的核苷酸序列中最重要的是位於編碼區上游的RNA聚合酶結合位點。RNA聚合酶是催化DNA轉錄為RNA。,能識別調控序列中的結合位點,並與其結合。 限制酶 restriction enzyme 是參與寄主支配性限制的酶,可識別 DNA的特定鹼基排列而切斷鏈的核酸內切酶,因此,又稱為核酸內切限制酶,目前已從各種細菌類中得到純化的特異性不同的酶。這種酶廣泛存在於生物界,並因生物種屬的不同而其特異性有所不同。因此在酶的名稱上加有生物種屬的簡稱。例如,從流感嗜血桿菌d(H-aemophilus influenzae d)菌株中分離出的酶稱為Hind限制酶或R.Hind(R為限制的縮寫)。又在同一生物種屬中含有複數的酶時,則再加上I,I等數字,從大腸桿菌的B株、K株等分離出來的酶,在反應時,必須有ATP、 S-腺苷蛋氨酸和Mg2 。與此相對應的,從持有耐藥因子的大腸桿菌中分離出的酶(R.Eco RⅠ,Ⅱ)和從嗜血桿菌屬(Haemoph-lius)分離出的酶(R.Hap, R.Hind, R.Hpa等),只需要Mg2 。這些酶決定著切斷部位的鹼基排列。雖排列因酶而有所不同,但都是具有雙重旋轉對稱性。例如,R·HindⅡ如下圖所示,是在第6個鹼基排列的部位按箭頭的位置切斷(A:腺苷,C:胞苷,G:鳥苷,T:胸苷,P:磷酸):另一方面,該菌含有的修飾酶在上面排列的腺苷上(帶*號的)使其甲基化,一旦甲基化後限制酶就不起作用了。通常認為限制酶和修飾酶在結構上是有關連的,例如,大腸桿菌B株的限制酶是由三個亞基組成,而修飾酶是由其中的二個亞基組成。

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