游泳池水中大腸菌群檢驗方法:
一、大腸菌群多管發酵法測定
1定義
大腸菌群(coliform bacteria)係指一群在36±1℃培養24h能發酵乳糖、產酸產氣的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。
2 儀器
見《公共場茶具的大腸菌群測定方法》。
3培養基和試劑
3.1乳糖蛋白腖培養液
3.1.1成分:蛋白腖 10g,牛肉膏 2g,乳糖 5g,氯化鈉 5g,1.6%(V/V)溴甲酚紫乙醇溶液 1mL,蒸餾水 1000mL
三.倍濃縮乳糖蛋白腖培養液按上述乳糖蛋白腖培養液濃縮三倍配製。
3.1.2配法:將蛋白腖、牛肉膏、乳糖及氯化鈉置於1000ml蒸餾水中加熱溶解,調pH到]7.2~7.4。再加入1ml 1.6%溴甲酚指示劑,充分混勻,分裝到含有倒管的試管中,115℃高壓滅菌15min。
3.2伊紅美蘭瓊脂
見《公共場所茶具的大腸菌群測定方法》。
3.3革蘭氏染色液
風《公共場所茶具的大腸菌群測定方法》。
3.4染色法
4推測性試驗
4.1在2個裝有50ml三倍濃縮乳糖膽鹽培養液的大試管或燒杯內各加入水樣100ml。
4.2在10支裝有5ml三倍濃縮乳糖膽鹽培養液的試管裡各加入水樣10ml。
4.3輕搖試管,使液體充分混勻,置36±1℃培養箱中,培養24h。
4.4觀察每管是否產氣,如不產氣則報告為大腸菌群陰性;若有氣體產生則為推測性試驗陽性,需做進一步的證實試驗。
5證實試驗
5.1平板分離
自推測性檢驗陽性管中取一接種環培養液,接種到伊紅美藍瓊脂平板上,置36±1℃培養箱培養18~24h,觀察菌落形態,典型的大腸菌群菌落為黑紫色或紅紫色,具有金屬光澤。
5.2復發酵試驗
挑取可疑大腸菌群菌落1或2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發酵管,於36±1℃培養箱中,培養24h。
5.3凡乳糖發酵管最終產酸產氣,革蘭氏染色為陰性的最大可能數(MPN)檢索表得出1000ml水樣中總大腸菌群的MPN值。
游泳池水中大腸菌群檢驗方法:
一、大腸菌群多管發酵法測定
1定義
大腸菌群(coliform bacteria)係指一群在36±1℃培養24h能發酵乳糖、產酸產氣的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。
2 儀器
見《公共場茶具的大腸菌群測定方法》。
3培養基和試劑
3.1乳糖蛋白腖培養液
3.1.1成分:蛋白腖 10g,牛肉膏 2g,乳糖 5g,氯化鈉 5g,1.6%(V/V)溴甲酚紫乙醇溶液 1mL,蒸餾水 1000mL
三.倍濃縮乳糖蛋白腖培養液按上述乳糖蛋白腖培養液濃縮三倍配製。
3.1.2配法:將蛋白腖、牛肉膏、乳糖及氯化鈉置於1000ml蒸餾水中加熱溶解,調pH到]7.2~7.4。再加入1ml 1.6%溴甲酚指示劑,充分混勻,分裝到含有倒管的試管中,115℃高壓滅菌15min。
3.2伊紅美蘭瓊脂
見《公共場所茶具的大腸菌群測定方法》。
3.3革蘭氏染色液
風《公共場所茶具的大腸菌群測定方法》。
3.4染色法
見《公共場所茶具的大腸菌群測定方法》。
4推測性試驗
4.1在2個裝有50ml三倍濃縮乳糖膽鹽培養液的大試管或燒杯內各加入水樣100ml。
4.2在10支裝有5ml三倍濃縮乳糖膽鹽培養液的試管裡各加入水樣10ml。
4.3輕搖試管,使液體充分混勻,置36±1℃培養箱中,培養24h。
4.4觀察每管是否產氣,如不產氣則報告為大腸菌群陰性;若有氣體產生則為推測性試驗陽性,需做進一步的證實試驗。
5證實試驗
5.1平板分離
自推測性檢驗陽性管中取一接種環培養液,接種到伊紅美藍瓊脂平板上,置36±1℃培養箱培養18~24h,觀察菌落形態,典型的大腸菌群菌落為黑紫色或紅紫色,具有金屬光澤。
5.2復發酵試驗
挑取可疑大腸菌群菌落1或2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發酵管,於36±1℃培養箱中,培養24h。
5.3凡乳糖發酵管最終產酸產氣,革蘭氏染色為陰性的最大可能數(MPN)檢索表得出1000ml水樣中總大腸菌群的MPN值。