一、水煮模板法——主要用於PCR反應:操作最簡便,對試劑條件要求低。缺點是純度不夠高可能會含有RNA、蛋白等雜質s但是作為-般檢測目的的PCR反應模板已經足夠了。:
有人稱擴增4kb以下片段都可用此種方法制取模版,編者用此類模板PCR可以擴增到3500bp的片段。編者建議:此法得到的模版儲存時間短,強烈建議每月重新制作-次。
二、CTAB/NaCl 法 :CTAB/NaCl法提取的DNA純度較高,蛋白雜質較少,儲存時間長,編者更喜歡把終濃度為20∪g/ml RnaseA加在第5步溫育的時候,這樣最後沒有RnaseA汙染每一步操作細緻一 些得到的DNA可用於Southern bloto編者建議:長時間儲存DNA可放於20C,但要儘裡減少反覆凍融,頹憬響DNA質量。
三、鹽析法:介於方法和方法二之間,CTAB雖然取出糖分效果較好,但CTAB本身也是有毒的所以此方法放棄了CTAB。
革蘭氏陽性菌,由於細胞的結構與陰性菌有差別,裂解比陰性菌稍微麻煩一些,可以採取CTAB/NaCl法稍加修改,在第四步加入終濃度2mg/ml 的溶菌酶,37 度溫育1h。
實驗注意:提基因組最好要將槍頭尖剪掉(剪掉以後在酒精燈上迅速過一下,使其斷口圓滑)。以免槍頭損傷基因組:抽乾時最好是風乾。
一、水煮模板法——主要用於PCR反應:操作最簡便,對試劑條件要求低。缺點是純度不夠高可能會含有RNA、蛋白等雜質s但是作為-般檢測目的的PCR反應模板已經足夠了。:
有人稱擴增4kb以下片段都可用此種方法制取模版,編者用此類模板PCR可以擴增到3500bp的片段。編者建議:此法得到的模版儲存時間短,強烈建議每月重新制作-次。
二、CTAB/NaCl 法 :CTAB/NaCl法提取的DNA純度較高,蛋白雜質較少,儲存時間長,編者更喜歡把終濃度為20∪g/ml RnaseA加在第5步溫育的時候,這樣最後沒有RnaseA汙染每一步操作細緻一 些得到的DNA可用於Southern bloto編者建議:長時間儲存DNA可放於20C,但要儘裡減少反覆凍融,頹憬響DNA質量。
三、鹽析法:介於方法和方法二之間,CTAB雖然取出糖分效果較好,但CTAB本身也是有毒的所以此方法放棄了CTAB。
革蘭氏陽性菌,由於細胞的結構與陰性菌有差別,裂解比陰性菌稍微麻煩一些,可以採取CTAB/NaCl法稍加修改,在第四步加入終濃度2mg/ml 的溶菌酶,37 度溫育1h。
實驗注意:提基因組最好要將槍頭尖剪掉(剪掉以後在酒精燈上迅速過一下,使其斷口圓滑)。以免槍頭損傷基因組:抽乾時最好是風乾。