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  • 1 # 你永遠追不上的巨人

    提取液:丙酮5ml。層析液:石油醚。在做葉綠體色素分離時用到,將葉片碾碎,浸出綠色液體,將液體與層析液(石油醚)混合,將濾紙一段進入混合液體,四種色素在層析液中的溶解度不同,在濾紙上留下4條色素帶。由此觀查出各種色素的相對含量和種類。紙層析法一般用於葉綠體中色素的分離,葉綠體中色素主要包括胡蘿蔔素、葉黃素、葉綠素a、葉綠素b,它們在層析液中的溶解度不同,溶解度大的隨層析液在濾紙上擴散地快,反之則慢;含量較多者色素帶也較寬。最後在濾紙上留下4條色素帶,所以利用紙層析法能清楚地將葉綠體中的色素分離。葉綠素提取後的色素帶分佈:最上端橙黃色為胡蘿蔔素,其次黃色為葉黃素,再下面藍綠色為葉綠素a,最後的黃綠色為葉綠素b。擴充套件資料葉綠素含量的測定方法主要有紫外分光光度法、熒光分析法、活體葉綠素儀法、光聲光譜法和高效液相色譜法。不過目前應用最為廣泛的還是分光光度法。葉綠素提取液的吸收光譜表明:有兩個強吸收峰,分別在紅光區和藍紫區,不同提取溶劑和原料所得的葉綠素溶液的吸收光譜比較相似。葉綠素a、葉綠素b的紅區最大吸收峰分別在663nm、645nm附近,在藍紫區分別為429nm、453nm附近。由於提取溶劑和原料不同,對葉綠素提取液進行光譜掃描後,所得的最大吸收值可能有較小範圍的浮動。高效液相色譜(HPLC)定量檢測葉綠素含量準確率較高,效果很好。用甲醇和丙酮作為流動相,體積比為80:20時,同時在流動相中加入質量分數為0.1%的冰醋酸,流速為1.0mL/min。利用每一種色素的色譜峰面積進行定量,葉綠素a、葉綠素b的定量可透過外標法由工作曲線求得。

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