樹突狀細胞的培養，目前還沒有傳代的細胞柱，大家一般採取的是兩種辦法，一種是從組織分離，主要應用的是細胞磁珠經過純化，然後配取合適的培養基進行誘導培養。
另一個就是單純的聯合誘導培養，我就是採用這個方法。具體的protocal如下：C57BL/6小鼠，6～8周齡，雌性，體重18～20g，購自北京軍事醫學科學院動物中心。細胞因子rmGM-CSF及rmIL-4為美國Peprotech公司產品。CD11C+細胞磁珠分離純化試劑盒為德國Milentyi公司產品。
1． 採用斷頭術處死小鼠，在75％的酒精中浸泡2－3min後，置於無菌平皿中，剪開面板。取出雙側股骨，用無菌的生理鹽水（或RPMI－1640代替）刷洗2－3次後剪開骨兩端，用1ml的注射器抽取RPMI－1640液，將骨髓細胞衝入15ml離心管中。
2． 將骨髓細胞輕輕吹打，使細胞完全懸浮，靜置五分鐘，然後轉入另一個15ml離心管中，離心，1200rpm，10min 。
3． 棄上清，細胞沉澱按1：10加入Tris-NH4CL緩衝液，輕輕吹打混勻，室溫放置五分鐘。
4． 離心後，棄上清，細胞沉澱用RPMI－1640洗滌兩遍。
5． 細胞計數，用RPMI－1640調整細胞濃度為0.5-1×105 ／ml，置於六孔培養板中，每孔2ml。
6． 37℃，5％CO2，飽和溼度下貼壁2－3h
7． 吸棄上清，用37℃預溫的RPMI－1640輕輕洗去非貼壁的細胞，每孔加入2ml的完全培養液繼續培養。
8． 隔日半定量換液，小心棄去懸浮細胞，輕輕轉動培養板，防止細胞凝集。第七天收集懸浮細胞，做相關的實驗。
按照如此方法培養的細胞效果相當好。一般流式檢測可以達到80％的純度。
樹突狀細胞的培養，目前還沒有傳代的細胞柱，大家一般採取的是兩種辦法，一種是從組織分離，主要應用的是細胞磁珠經過純化，然後配取合適的培養基進行誘導培養。
另一個就是單純的聯合誘導培養，我就是採用這個方法。具體的protocal如下：C57BL/6小鼠，6～8周齡，雌性，體重18～20g，購自北京軍事醫學科學院動物中心。細胞因子rmGM-CSF及rmIL-4為美國Peprotech公司產品。CD11C+細胞磁珠分離純化試劑盒為德國Milentyi公司產品。
1． 採用斷頭術處死小鼠，在75％的酒精中浸泡2－3min後，置於無菌平皿中，剪開面板。取出雙側股骨，用無菌的生理鹽水（或RPMI－1640代替）刷洗2－3次後剪開骨兩端，用1ml的注射器抽取RPMI－1640液，將骨髓細胞衝入15ml離心管中。
2． 將骨髓細胞輕輕吹打，使細胞完全懸浮，靜置五分鐘，然後轉入另一個15ml離心管中，離心，1200rpm，10min 。
3． 棄上清，細胞沉澱按1：10加入Tris-NH4CL緩衝液，輕輕吹打混勻，室溫放置五分鐘。
4． 離心後，棄上清，細胞沉澱用RPMI－1640洗滌兩遍。
5． 細胞計數，用RPMI－1640調整細胞濃度為0.5-1×105 ／ml，置於六孔培養板中，每孔2ml。
6． 37℃，5％CO2，飽和溼度下貼壁2－3h
7． 吸棄上清，用37℃預溫的RPMI－1640輕輕洗去非貼壁的細胞，每孔加入2ml的完全培養液繼續培養。
8． 隔日半定量換液，小心棄去懸浮細胞，輕輕轉動培養板，防止細胞凝集。第七天收集懸浮細胞，做相關的實驗。
按照如此方法培養的細胞效果相當好。一般流式檢測可以達到80％的純度。