沉澱DNA時,用到的醋酸銨溶液pH在8左右,略微鹼性。
DNA的沉澱:
採用無水乙醇沉澱DNA是實驗室的常用方法。
在DNA溶液中,DNA分子與水分子呈水合狀態,當加入乙醇後,乙醇可以奪去DNA分子周圍的水,從而使得DNA分子失水而易於聚合。 乙醇的優點是可以任意比和水融合,而且不會和DNA發生化學反應,DNA分子在乙醇中能夠穩定儲存,因此可以作為沉澱DNA的良好試劑。
一般用2倍體積的無水乙醇沉澱DNA,使乙醇最終含量為67%左右(關鍵)。當沉澱RNA時一般用2.5倍的體積。因此也可以用95%的乙醇等代替,但是此時終體積將會較大,且DNA在溶液中會有一定的損耗。因此當多次沉澱時,做好採取折中的方法,即初次用95%的乙醇沉澱後,之後採用無水乙醇代替。
另外也可以用0.6倍體積的異丙醇(IPA)沉澱。與乙醇相比,異丙醇比較疏水,極性較弱,因此鹽離子會與DNA分子共沉澱,不利於去鹽,但卻因此可以去除蛋白質、糖等雜質(高濃度的鹽可以使糖存在於溶液中從而去除)。而乙醇可以有效去除鹽離子。另外,乙醇易揮發,所以通常會先用異丙醇沉澱,再用乙醇多次洗去鹽。
沉澱時間一般是15-30分鐘即可。
沉澱過程中一般會加入醋酸鈉或氯化鈉,因為在pH為8時,DNA分子帶負電荷,鹽釋放的正電荷可以與其反應,從而促進其聚合沉澱。當然鹽離子濃度也不可太高,否會影響後續反應,如酶切等,故得多次脫鹽。
沉澱DNA時,用到的醋酸銨溶液pH在8左右,略微鹼性。
DNA的沉澱:
採用無水乙醇沉澱DNA是實驗室的常用方法。
在DNA溶液中,DNA分子與水分子呈水合狀態,當加入乙醇後,乙醇可以奪去DNA分子周圍的水,從而使得DNA分子失水而易於聚合。 乙醇的優點是可以任意比和水融合,而且不會和DNA發生化學反應,DNA分子在乙醇中能夠穩定儲存,因此可以作為沉澱DNA的良好試劑。
一般用2倍體積的無水乙醇沉澱DNA,使乙醇最終含量為67%左右(關鍵)。當沉澱RNA時一般用2.5倍的體積。因此也可以用95%的乙醇等代替,但是此時終體積將會較大,且DNA在溶液中會有一定的損耗。因此當多次沉澱時,做好採取折中的方法,即初次用95%的乙醇沉澱後,之後採用無水乙醇代替。
另外也可以用0.6倍體積的異丙醇(IPA)沉澱。與乙醇相比,異丙醇比較疏水,極性較弱,因此鹽離子會與DNA分子共沉澱,不利於去鹽,但卻因此可以去除蛋白質、糖等雜質(高濃度的鹽可以使糖存在於溶液中從而去除)。而乙醇可以有效去除鹽離子。另外,乙醇易揮發,所以通常會先用異丙醇沉澱,再用乙醇多次洗去鹽。
沉澱時間一般是15-30分鐘即可。
沉澱過程中一般會加入醋酸鈉或氯化鈉,因為在pH為8時,DNA分子帶負電荷,鹽釋放的正電荷可以與其反應,從而促進其聚合沉澱。當然鹽離子濃度也不可太高,否會影響後續反應,如酶切等,故得多次脫鹽。