死細胞，細胞碎片會對RNA的純度產生影響
從組織中用TRIZOL提RNA時組織的量並不是越多越好，在一定範圍內是正好相反。我曾經做過對比，同一塊組織經勻漿後做一定稀釋，分別取50、100、150、200ul勻漿液提RNA做反轉錄PCR，除了組織的量不同外其它條件都一致，結果只有50ul的樣品擴出了所需要的目的片段，經克隆測序驗證正確。
提RNA的關鍵是Trizol的量要足，一般是10*6~10*7細胞加1ml Trizol，細胞數太多，Trizol的量相對就不足，裂解不完全，影響RNA的質量。一定要充分吹打混勻直至溶液澄清！！這時可以加氯仿往下做，也可以放在－20℃下凍存起來，到需要時再往下做，我放過一個多月再提RNA還是好的。另外加氯仿後要充分振盪混勻呈乳狀，然後在室溫下靜置3~5分鐘再去低溫離心，分層都很明顯，一般都有500~600μl的水相。後面的步驟就是沉澱、洗滌的過程了，最後用DEPC水溶解，按照程式來就ok了！加入異丙醇後也要在室溫下靜置10分鐘再去離心比較好，也有的說在－20℃下靜置
純度與組織或是細胞的量確實相關,不過前提是TRIZOL加的量少;
如果加與組織或細胞相適應的TRIZOL量就可以充分裂解,去除蛋白了
1 TRIZOL去蛋白水平不行; 可是以前還好啊,TRIZOL是前三個月前訂的,應該不會失效這麼快.
2 TRIZOL未充分裂解,加入TRIZOL後我就用槍吹打數次, 然後間斷振盪, 不知大家怎麼做的?到底該怎麼讓其充分裂解呢? 要是提組織RNA呢?怎麼讓TRIZOL充分裂解組織呢?
3 氯仿去蛋白水平不行; 可是以前還好啊,氯仿作為萃取溶劑,應該不存在汙染失效的問題吧.
4 氯仿未充分與裂解液作用, 可是我劇烈振搖30秒,應該可以了吧?
5 加入氯仿靜置時間短,導致分層不明顯:同樣10管,我都放了15分鐘,有一管分層明顯,就能夠說明時間夠了;
6 加入的組織過多?導致TRIZOL不能完全消化?我一般加入的組織是黃豆大小,加1毫升TRIZOL裂解,研磨消化完全後,加入氯仿
死細胞，細胞碎片會對RNA的純度產生影響
從組織中用TRIZOL提RNA時組織的量並不是越多越好，在一定範圍內是正好相反。我曾經做過對比，同一塊組織經勻漿後做一定稀釋，分別取50、100、150、200ul勻漿液提RNA做反轉錄PCR，除了組織的量不同外其它條件都一致，結果只有50ul的樣品擴出了所需要的目的片段，經克隆測序驗證正確。
提RNA的關鍵是Trizol的量要足，一般是10*6~10*7細胞加1ml Trizol，細胞數太多，Trizol的量相對就不足，裂解不完全，影響RNA的質量。一定要充分吹打混勻直至溶液澄清！！這時可以加氯仿往下做，也可以放在－20℃下凍存起來，到需要時再往下做，我放過一個多月再提RNA還是好的。另外加氯仿後要充分振盪混勻呈乳狀，然後在室溫下靜置3~5分鐘再去低溫離心，分層都很明顯，一般都有500~600μl的水相。後面的步驟就是沉澱、洗滌的過程了，最後用DEPC水溶解，按照程式來就ok了！加入異丙醇後也要在室溫下靜置10分鐘再去離心比較好，也有的說在－20℃下靜置
純度與組織或是細胞的量確實相關,不過前提是TRIZOL加的量少;
如果加與組織或細胞相適應的TRIZOL量就可以充分裂解,去除蛋白了
1 TRIZOL去蛋白水平不行; 可是以前還好啊,TRIZOL是前三個月前訂的,應該不會失效這麼快.
2 TRIZOL未充分裂解,加入TRIZOL後我就用槍吹打數次, 然後間斷振盪, 不知大家怎麼做的?到底該怎麼讓其充分裂解呢? 要是提組織RNA呢?怎麼讓TRIZOL充分裂解組織呢?
3 氯仿去蛋白水平不行; 可是以前還好啊,氯仿作為萃取溶劑,應該不存在汙染失效的問題吧.
4 氯仿未充分與裂解液作用, 可是我劇烈振搖30秒,應該可以了吧?
5 加入氯仿靜置時間短,導致分層不明顯:同樣10管,我都放了15分鐘,有一管分層明顯,就能夠說明時間夠了;
6 加入的組織過多?導致TRIZOL不能完全消化?我一般加入的組織是黃豆大小,加1毫升TRIZOL裂解,研磨消化完全後,加入氯仿