DNA重組技術步驟如下：

一、質粒DNA

提取的pQE-31和pUC18-CAT質粒。

二、製備重組DNA

1.在滅菌的1.5mL離心管中，加入pQE-31質粒10mL(2mg／mL)，2mL酶切緩衝液，1mLBamHI和HindIII酶的混合液（各含10個單位），無菌雙蒸水7mL，至反應混合物總體積為20mL，離心混勻，37℃反應過夜。

2.在另一無菌1.5mL離心管中，加pUC18-CAT質粒20mL，加入3mL酶切反應液，lmLBamHI和HindIII酶的混合液，無菌雙蒸水補到30mL，37℃反應過夜。

3.反應完畢後取5mLpQE-31質粒的酶切液做電泳分析，檢驗酶切是否完全。酶切完全，進行下一步。

4.將酶切處理的後pQE-31和pUC18-CAT質粒，分別上樣跑瓊脂糖凝膠電泳（注意加DNA分子量標準）。電泳結束後用DNA瓊脂糖膠純化試劑盒按照試劑盒說明書的方法回收DNA片段。前者回收的片段為3.5kb，後者為650bp。

5.將回收的pQE-31載體質粒均分為兩份，其中一份與酶切後回收的CAT片段混合，做連線；另一份不加CAT片段，做對照。操作如下：

在10mLDNA樣品中，加T4DNA連線酶緩衝液1mL，T4DNA連線酶1mL，14℃（室溫）過夜，然後做大腸桿菌的轉化。

三、轉化感受態細胞

1.製備的感受態細胞(-20℃儲存的)。

2.在100mL的融化後處於冰浴的感受態細胞中，加入10mL連線產物，混勻，冰上放置30分鐘，以後的操作參照實驗一進行。同時做未加CAT片段的空白pQE-31載體質粒連線處理後的感受態細胞轉化的對照。

實驗結果

過夜培養後，實驗組和對照組的兩個培養皿上都可能會出現一些菌落。如果實驗組的菌落數明顯多於對照組的菌落，則是好徵兆，但實驗組中出現的菌落是否含有所需的DNA重組子還須進一步鑑定。