1. 切片常規脫蠟至水。如需抗原修復，可在此步後進行
2.緩衝液洗 3min/2 次。
3. 為了降低內源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色，將切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分鐘。
4. 緩衝液洗 5min/2 次。
5. 滴加 Ultra V Block ， 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。
(注:孵育不要超過 10 分鐘，否則會導致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 - 10% 正常羊血清，這一步可以省略。)
6. 緩衝液洗 5min/2 次。
7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小時。(具體孵育時間和溫度由試驗者最終決定)
8. 緩衝液洗 5min/2 次。
9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer(增強子)，在室溫下孵育 20 分鐘。
10 .緩衝液洗 5min/2 次。
11 .滴加 HRP Polymer(酶標二抗) ，在室溫下孵育 30 分鐘。
(注:HRP Polymer 對光敏感，應避免不必要的光暴露並儲存在不透明的小瓶中。)
12 .緩衝液洗 5min/2 次。
13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen)，混勻後滴加到切片上，孵育 3 - 15 分鐘。(具體時間由染色深淺決定。)
14 .自來水充分沖洗，復染，脫水，透明，封片。
簡介：
免疫組化，是應用免疫學基本原理--抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，透過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質)，對其進行定位、定性及相對定量的研究，稱為免疫組織化學技術(immunohistochemistry)或免疫細胞化學技術(immunocytochemistry)。
基本原理：
抗體和抗原之間的結合具有高度的特異性，免疫組織化學正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學物質提取出來，以此作為抗原或半抗原，透過免疫動物後獲得特異性的抗體，再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質。由於抗原與抗體的複合物是無色的，因此還必須藉助於組織化學的方法將抗原抗體結合的部位顯示出來，以其達到對組織或細胞中的未知抗原進行定性，定位或定量的研究。
1. 切片常規脫蠟至水。如需抗原修復，可在此步後進行
2.緩衝液洗 3min/2 次。
3. 為了降低內源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色，將切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分鐘。
4. 緩衝液洗 5min/2 次。
5. 滴加 Ultra V Block ， 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。
(注:孵育不要超過 10 分鐘，否則會導致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 - 10% 正常羊血清，這一步可以省略。)
6. 緩衝液洗 5min/2 次。
7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小時。(具體孵育時間和溫度由試驗者最終決定)
8. 緩衝液洗 5min/2 次。
9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer(增強子)，在室溫下孵育 20 分鐘。
10 .緩衝液洗 5min/2 次。
11 .滴加 HRP Polymer(酶標二抗) ，在室溫下孵育 30 分鐘。
(注:HRP Polymer 對光敏感，應避免不必要的光暴露並儲存在不透明的小瓶中。)
12 .緩衝液洗 5min/2 次。
13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen)，混勻後滴加到切片上，孵育 3 - 15 分鐘。(具體時間由染色深淺決定。)
14 .自來水充分沖洗，復染，脫水，透明，封片。
簡介：
免疫組化，是應用免疫學基本原理--抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，透過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質)，對其進行定位、定性及相對定量的研究，稱為免疫組織化學技術(immunohistochemistry)或免疫細胞化學技術(immunocytochemistry)。
基本原理：
抗體和抗原之間的結合具有高度的特異性，免疫組織化學正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學物質提取出來，以此作為抗原或半抗原，透過免疫動物後獲得特異性的抗體，再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質。由於抗原與抗體的複合物是無色的，因此還必須藉助於組織化學的方法將抗原抗體結合的部位顯示出來，以其達到對組織或細胞中的未知抗原進行定性，定位或定量的研究。