作為一個微生物學博士,雖然做的是基因水平的一些研究,但是以前痛苦的微生物篩選以及培養工作的經歷仍歷歷在目。
我做的是細菌的產酸代謝過程。下面我就自己做實驗的一些建議說一下:
第一,細節生長觀測。
一般配置好的培養基是澄清的,滅菌後,接種細菌,置於無菌搖床,震盪。通常情況下,如果細菌接種成功,培養基會變渾濁,甚至還有可能看到明顯的菌體團結,沉澱。
第二,細菌計數方法。
細菌計數方法主要有3種。
1.計數器法
採用血細胞計數器進行計數。取一定體積的菌懸液置於細胞計數室內,用顯微鏡觀察計數。由於計數室的容積是固定的,一般為0.1m3,因此,根據計數器刻度內的細菌數可以估算菌懸液重大概細菌數。
2.活細胞數記數法
此法主要上課根據每個活細胞能長出一個菌落的原理設計的。取一定體積菌懸液,製備不同濃度梯度的菌懸液,然後塗布在固體培養基上,恆溫培養1-2d,觀察平板上菌落生長情況,計算菌落個數。
3.OD600法
測定菌懸液在600nm處吸光值,用OD600的值表示細菌濃度大小。OD600越大,細菌濃度越高。
細菌計數還有細胞乾重法,細胞總碳氮法等,但操作不方便,不適合科研工作者。所以應用較少。
作為一個微生物學博士,雖然做的是基因水平的一些研究,但是以前痛苦的微生物篩選以及培養工作的經歷仍歷歷在目。
我做的是細菌的產酸代謝過程。下面我就自己做實驗的一些建議說一下:
第一,細節生長觀測。
一般配置好的培養基是澄清的,滅菌後,接種細菌,置於無菌搖床,震盪。通常情況下,如果細菌接種成功,培養基會變渾濁,甚至還有可能看到明顯的菌體團結,沉澱。
第二,細菌計數方法。
細菌計數方法主要有3種。
1.計數器法
採用血細胞計數器進行計數。取一定體積的菌懸液置於細胞計數室內,用顯微鏡觀察計數。由於計數室的容積是固定的,一般為0.1m3,因此,根據計數器刻度內的細菌數可以估算菌懸液重大概細菌數。
2.活細胞數記數法
此法主要上課根據每個活細胞能長出一個菌落的原理設計的。取一定體積菌懸液,製備不同濃度梯度的菌懸液,然後塗布在固體培養基上,恆溫培養1-2d,觀察平板上菌落生長情況,計算菌落個數。
3.OD600法
測定菌懸液在600nm處吸光值,用OD600的值表示細菌濃度大小。OD600越大,細菌濃度越高。
細菌計數還有細胞乾重法,細胞總碳氮法等,但操作不方便,不適合科研工作者。所以應用較少。