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  • 1 # lily8682

    分光光度計介紹:

    分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用於核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。分光光度計就是利用分光光度法對物質進行定量定性分析的儀器。該儀器是食品廠、飲用水廠辦理QS、HACCP認證的必備檢驗裝置。

    分光光度計原理:

    分光光度計採用一個可以產生多個波長的光源,透過系列分光裝置,從而產生特定波長的光源,光線透過測試的樣品後,部分光線被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

    分光光度計組成:主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、訊號處理器和顯示與儲存系統組成。

    分光光度定義:

    分光光度法是透過測定被測物質在特定波長處或一定波長範圍內光的吸收度,對該物質進行定性和定量分析。

    常用的波長範圍:

    (1)200~400nm的紫外光區

    (2)400~760nm的可見光區

    (3)2.5~25μm(按波數計為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區

    所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度,所有儀器應按照國家計量檢定規程或本附錄規定,定期進行校正檢定。

    分光光度計的重要配件—— 比色杯

    比色杯按照材質大致分為石英杯、玻璃杯以及塑膠杯。根據不同的測量體積,有比色杯和毛細比色杯等。一般測試核酸和紫外定量蛋白,均採用石英杯或者玻璃杯,但是不適合比色法測定。因為反應中的染料(如考馬斯亮蘭)能讓石英和玻璃著色,所以必須採用一次性的塑膠杯。而塑膠杯一般不適合用於在紫外範圍內測試樣品。

    分光光度計操作方法:

    1.接通電源,開啟儀器開關,掀開樣品室暗箱蓋,預熱10分鐘。

    2.將靈敏度開關調至“1”檔(若零點調節器調不到“0”時,需選用較)。

    3.根據所需波長轉動波長選擇鈕。

    4.將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處,用擦鏡紙擦清外壁,放入樣品室內,使空白管對準光路。

    5.在暗箱蓋開啟狀態下調節零點調節器,使讀數盤指標指向t=0處。

    6.蓋上暗箱蓋,調節“100”調節器,使空白管的t=100,指標穩定後逐步拉出樣品滑竿,分別讀出測定管的光密度值,並記錄。

    7.比色完畢,關上電源,取出比色皿洗淨,樣品室用軟布或軟紙擦淨。

    分光光度計注意事項:

    1.該儀器應放在乾燥的房間內,使用時放置在堅固平穩的工作臺上,室內照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風,防止燈泡燈絲髮亮不穩定。

    2.使用本儀器前,使用者應該首先了解本儀器的結構和工作原理,以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前,應該對儀器的安全效能進行檢查,電源接線應牢固,通電也要良好,各個調節旋鈕的起始位置應該正確,然後再按通電源開關。

    3.在儀器尚未接通電源時,電錶指標必須於“0”刻線上,若不是這種情況,則可以用電錶上的校正螺絲進行調節。

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