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你真正的的問題應該是如何養細胞,才能使體外培養的細胞儘量保持其在體內的特性吧?畢竟長得漂亮沒有一個統一的標準。
對於多數上皮細胞和間質細胞,最廣泛使用的培養方法是貼壁二維培養。對於多數細胞,只要完全按照ATCC上的方法培養,一般都可以很好地保持細胞原來狀態。最值得注意的是,每次傳細胞的時候不要傳得太稀,儘量多多凍存底代數的細胞,不要讓細胞增殖太多代數。否則會人為篩選出具有生長優勢的細胞克隆,從而改變細胞原始特性。所有培養細胞用的試劑最好從具有良好聲譽的公司購買,儘量不要輕易更換供應商。
二維培養的細胞可以滿足大多數實驗的需求,但是並不是最好的方法。現在最好的方法應該是類器官細胞培養技術。簡而言之就是把細胞養在特殊的基質膠在,使用無血清培養基,透過加入一系列必要的細胞因子誘導細胞分化出類器官結構。這樣可以使細胞在最大程度上保持其在體內的特性。
細胞是生物實驗的常用材料之一,要想實驗結果準確,細胞狀態非常重要,因此如何把細胞養的漂亮就很重了。主要有以下幾個方面需要注意。
第一就是培養基。雖然說細胞培養基主要是無機鹽,氨基酸和糖類,但是不同廠家的培養基還是有區別的,比如各成分比例,各成分的純度等都是不一樣的。要想細胞養得好,培養基的質量一定要過硬。有些實驗室還在用手工配的培養基,雖然說成分上沒有問題,但是還是推薦購買大公司的成品培養基,比如sigma,thermo Fisher,hyclone等,當然中國產的碧雲天的培養基效果也還是不錯的。
針對不同細胞也要選擇不同型別的培養基,因為有些細胞需要在培養基中加入特殊的成分去維持細胞生長,比如一般的腫瘤細胞用DMEM培養基就可以了;軟骨細胞要用F12培養基,白血病細胞一般用1640培養基等等。還有些細胞需要在基礎培養基總新增一些特殊成分,都需要特別注意,一定要用該細胞最合適的培養基。有的細胞雖然好幾種培養基都可以用,我們也要用最常用的那種,即使貴一點點。
第二點就是血清。血清質量真的差距太大了,有人甚至說:寧願用國外的小牛血清,也不要用中國產胎牛血清。雖然這話說的有些過激,但是卻很好地突出了血清的重要性。我們都知道不新增血清大多數細胞是無法增殖的,或增殖非常的慢,因為血清中含有很多的細胞因子,這些細胞因子都是有活性的,是細胞生長必需的。一般jibico的血清質量是很好地,sigama,hyclone也都有血清賣,效果都還是不錯的,價格也很貴,千萬不要因為怕血清貴而選擇小眾的血清。
第三點就是培養瓶和培養皿。雖然培養瓶和培養皿的製造技術相對比較簡單,技術也很成熟,但是從使用效果來說,進口的還是靠譜點,我們常用的是corning和jetbio的,後者好像是廣州的,效果有時候感覺培養皿不是很好,嬌嫩的細胞在培養皿里長勢就差點,不知道是不是錯覺。
第四點是細胞培養條件。一般來說,細胞培養大多數都是37℃,5%CO2,20%O2,基本都沒有什麼問題,但是需要注意定時清潔培養箱,因為細胞房每天進進出出都會帶入細菌,一旦細菌在細胞房增值了,空氣中漂浮較多時候,就有可能帶入培養皿,培養瓶一般空氣中的細菌很難帶入,培養皿密封性差點,容易出問題。此外,有些細胞最合適的培養溫度可能不是37℃,這就需要特別注意了,最好單獨搞一個培養箱培養。
第五點是細胞傳代。細胞傳代不同細胞的傳代比例是不一樣的,腫瘤細胞可能1/3就可以長得不錯,但是有些細胞就不行,需要1/2進行傳代,需要視具體情況操作。同時在用胰酶消化的過程中要避免消化過渡,一般在1-3min即可,時間長了對細胞狀態也有一點影響的。同時,細胞傳代的時間也要把握好,一般漲到80%左右就傳代,這時候細胞處於對數期,細胞狀態比較好,長滿以後細胞就會逐漸衰老,所以細胞能今天傳代就不要拖到明天。
關於如何養好細胞的主要把握的就是以上幾點,只要平時多關注細胞狀態,絕大部分細胞都是可以養好的。