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  • 1 # 哼哼9801

    酵母菌常見於含糖份比較高的環境中,如果園土、菜園土及果皮等的表面。多數酵母菌喜歡偏酸條件,最適pH為4.5-6.0.酵母菌生長迅速,容易分離培養。在液體培養基中,酵母菌比黴菌生長快,利用酸性條件則可以抑制細菌的生長。因此常用酸性液體培養基獲得酵母菌的加富培養,然後在固體培養基上劃線分離純化。

    一~準備實驗器材和用品

    1、甘蔗、蘋果皮、葡萄皮、果園土、菜園土等。

    2、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基:馬鈴薯200g(煮開10min後過濾取汁),葡萄糖20g,瓊脂20g,水1000ml,pH自然。分裝三角瓶;試管斜面1支/組

    3、乳酸馬鈴薯葡萄糖培養液:配方同上,不加瓊脂加乳酸,按1000ml培養基加入5ml乳酸,pH為5.5左右,再分裝試管9ml2支/組。

    4、無菌吸管3支/組、無菌培養皿、100ml無菌水1瓶/組、塗棒、美蘭染液、顯微鏡、接種環等。

    二~實驗方法

    1、接種:取果皮(不需沖洗)或土壤5克,加入到100ml無菌水中,充分攪拌後,用無菌吸管取1ml接入到9ml乳酸馬鈴薯葡萄糖培養液中,在28-30℃培養箱中培養24h,可見培養液變渾濁。

    2、加富培養:用無菌吸管取上述培養液1ml,注入另1管乳酸馬鈴薯葡萄糖培養液中,在28-30℃培養箱中培養24h。

    3、鏡檢:用無菌操作法用接種環取少量菌液置於載玻片上,中央滴一滴美蘭染液,混合均勻後製成水浸片,在高倍鏡下觀察酵母菌的形態及出芽方式,並可根據菌體是否染色來區分酵母菌的死活細胞,因活細胞使美蘭染液還原,故菌體不著色。

    4、塗皿:用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基溶化後製成平板,用無菌吸管取0.1ml加富培養液到平板中,用塗棒塗勻後培養24h。

    5、分離純化:用接種環挑取單個酵母菌菌落,在平板上四區劃線,培養後分離得到單個菌落。

    6、鏡檢:挑取單菌落,製片觀察其形態。

    7、菌種保藏:接種酵母菌到馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面培養基上,長出菌苔後冰箱保藏。

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