製作過程大約有幾個步驟：1、配製溶液。向容器內加入所需水量的一部分，按照培養基的配方，稱取各種原料，依次加入使其溶解，最後補足所需水分。對蛋白腖、肉膏等物質，需加熱溶解，加熱過程所蒸發的水分，應在全部原料溶解後加水補足。
2、調節pH值 。
用pH試紙（或pH電位計、氫離子濃度比色計）測試培養基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH進行調節，直到調節到配方要求的pH值為止。
3、過濾。
用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養基過濾。用紗布過濾時，最好摺疊成六層，用濾紙過濾時，可將濾紙摺疊成瓦稜形，鋪在漏斗上過濾。
4、分裝。
已過濾的培養基應進行分裝。如果要製作斜面培養基，須將培養基分裝於試管中。如果要製作平培養基或液體、半固體培養基，則須將培養基分裝於錐形瓶內。
分裝時，注意不要使培養基粘附管口或瓶口，以免浸溼棉塞引起雜菌汙染。
5、加棉塞 。
分裝完畢後，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣，避免汙染。棉塞應採用普通新鮮、乾燥的棉花製作，不要用脫脂棉，以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用。
棉塞作成後，應迅速塞入管口或瓶口中，棉塞應緊貼。塞好棉塞的試管和錐形瓶應蓋上厚紙用繩捆札，準備滅菌。
6、製作斜面培養基和平板培養基。
培養基滅菌後，如製作斜面培養基和平板培養基，須趁培養基未凝固時進行。
(1)製作斜面培養基。在實驗臺上放1支長0.5～1米左右的木條，厚度為1釐米左右。將試管頭部枕在木條上，使管內培養基自然傾斜，凝固後即成斜面培養基。
(2)製作平板培養基。將剛剛滅過菌的盛有培養基的錐形瓶和培養皿放在實驗臺上，點燃酒精燈，右手托起錐形瓶瓶底，左手拔下棉塞，將瓶口在酒精燈上稍加灼燒，左手開啟培養皿蓋，右手迅速將培養基倒入培養皿中，每皿約倒入10毫升，以鋪滿皿底為度。
鋪放培養基後放置15分鐘左右，待培養基凝固後，再5個培養皿一疊，倒置過來，平放在恆溫箱裡，24小時後檢查，如培養基未長雜菌，即可用來培養微生物。
製作過程大約有幾個步驟：1、配製溶液。向容器內加入所需水量的一部分，按照培養基的配方，稱取各種原料，依次加入使其溶解，最後補足所需水分。對蛋白腖、肉膏等物質，需加熱溶解，加熱過程所蒸發的水分，應在全部原料溶解後加水補足。
2、調節pH值 。
用pH試紙（或pH電位計、氫離子濃度比色計）測試培養基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH進行調節，直到調節到配方要求的pH值為止。
3、過濾。
用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養基過濾。用紗布過濾時，最好摺疊成六層，用濾紙過濾時，可將濾紙摺疊成瓦稜形，鋪在漏斗上過濾。
4、分裝。
已過濾的培養基應進行分裝。如果要製作斜面培養基，須將培養基分裝於試管中。如果要製作平培養基或液體、半固體培養基，則須將培養基分裝於錐形瓶內。
分裝時，注意不要使培養基粘附管口或瓶口，以免浸溼棉塞引起雜菌汙染。
5、加棉塞 。
分裝完畢後，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣，避免汙染。棉塞應採用普通新鮮、乾燥的棉花製作，不要用脫脂棉，以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用。
棉塞作成後，應迅速塞入管口或瓶口中，棉塞應緊貼。塞好棉塞的試管和錐形瓶應蓋上厚紙用繩捆札，準備滅菌。
6、製作斜面培養基和平板培養基。
培養基滅菌後，如製作斜面培養基和平板培養基，須趁培養基未凝固時進行。
(1)製作斜面培養基。在實驗臺上放1支長0.5～1米左右的木條，厚度為1釐米左右。將試管頭部枕在木條上，使管內培養基自然傾斜，凝固後即成斜面培養基。
(2)製作平板培養基。將剛剛滅過菌的盛有培養基的錐形瓶和培養皿放在實驗臺上，點燃酒精燈，右手托起錐形瓶瓶底，左手拔下棉塞，將瓶口在酒精燈上稍加灼燒，左手開啟培養皿蓋，右手迅速將培養基倒入培養皿中，每皿約倒入10毫升，以鋪滿皿底為度。
鋪放培養基後放置15分鐘左右，待培養基凝固後，再5個培養皿一疊，倒置過來，平放在恆溫箱裡，24小時後檢查，如培養基未長雜菌，即可用來培養微生物。