一、使用陰性血清測定結果均值的2或3倍作為CUT OFF值
該方法是取一定數量（通常不多）的陰性血清樣本，使用免疫檢測試劑盒進行測定，取陰性樣本的測值的平均值。若上述陰性樣本的平均值為X，則該次測定的CUT OFF值為2X或3X。例如，試劑盒結果判定以S（樣本測值）/N（陰性對平均測值）≥2.1為陽性，其依據即是以陰性參考血清的2.1倍作為CUT OFF值。通常為了避免陰性樣本測值過低導致的CUT OFF值過低，還會規定陰性樣本平均測值不到某一特定值，如0.05時，以0.05計算，即CUT OFF值不低於0.10。採用這種方法設定CUTOFF值，可以有效避免假陽性結果的出現，但易導致假陰性結果較多，是一種非常粗糙的CUT OFF值設定方法。
二、陰性對照平均測值+2個標準差（SD）或3SD作為CUT OFF值
先取大量（數千）正常人（陰性）血清樣本進行檢測，當陰性樣本量足夠大時，使用試劑盒檢測所得測值將呈正態分佈，若要求95.3％(單側)的可信度，可將陰性樣本平均測值+2SD作為CUT OFF值；若要求99%（單側）的可信度，則以陰性樣本平均測值+3SD作為CUT OFF值。這種方法建立在統計學計算的基礎上，相比於第一種方法，更為科學。但這種方法僅考慮正常人群（陰性樣本），因此難以界定“灰區”，幾乎所有灰區樣本都陰性結果處理，可能會出現較多假陰性。
一、使用陰性血清測定結果均值的2或3倍作為CUT OFF值
該方法是取一定數量（通常不多）的陰性血清樣本，使用免疫檢測試劑盒進行測定，取陰性樣本的測值的平均值。若上述陰性樣本的平均值為X，則該次測定的CUT OFF值為2X或3X。例如，試劑盒結果判定以S（樣本測值）/N（陰性對平均測值）≥2.1為陽性，其依據即是以陰性參考血清的2.1倍作為CUT OFF值。通常為了避免陰性樣本測值過低導致的CUT OFF值過低，還會規定陰性樣本平均測值不到某一特定值，如0.05時，以0.05計算，即CUT OFF值不低於0.10。採用這種方法設定CUTOFF值，可以有效避免假陽性結果的出現，但易導致假陰性結果較多，是一種非常粗糙的CUT OFF值設定方法。
二、陰性對照平均測值+2個標準差（SD）或3SD作為CUT OFF值
先取大量（數千）正常人（陰性）血清樣本進行檢測，當陰性樣本量足夠大時，使用試劑盒檢測所得測值將呈正態分佈，若要求95.3％(單側)的可信度，可將陰性樣本平均測值+2SD作為CUT OFF值；若要求99%（單側）的可信度，則以陰性樣本平均測值+3SD作為CUT OFF值。這種方法建立在統計學計算的基礎上，相比於第一種方法，更為科學。但這種方法僅考慮正常人群（陰性樣本），因此難以界定“灰區”，幾乎所有灰區樣本都陰性結果處理，可能會出現較多假陰性。