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  • 1 # roygy43395

      bradford和lowry兩者都是生物檢驗的化學試劑。  bradford法,也稱考馬斯藍染色法(coomassie blue staining)。考馬斯亮藍G-250測定蛋白質含量屬於染料結合法的一種。考馬斯亮藍G-250在遊離態下呈紅色,當它與蛋白質的疏水區結合後變為青色,前者最大光吸收在 465nm,後者在595nm。在一定蛋白質濃度範圍內(0~100μg/ml),蛋白質-色素結合物在595nm波長下的光吸收與蛋白質含量成正比。故可用於蛋白質的定量測定。蛋白質與考馬斯亮藍G-250結合在2min左右的時間內達到平衡,完成反應十分迅速,其結合物在室溫下1h內保持穩定。該反應非常靈敏,可測微克級蛋白質含量,所以是一種比較好的蛋白質定量法。  Lowry法是雙縮脲法和福林酚法的結合與發展,其原理是:蛋白質溶液用鹼性銅溶液處理,形成銅-蛋白質的絡合鹽,再加入酚試劑後,除使肽鏈中酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸等顯色外,還使雙縮脲法中肽鍵、鹼性銅的顯色效果更強烈。因此,Lowry法的顯色效果比單獨使用酚試劑強烈3~15倍,為雙縮脲法100 倍。由於肽鍵顯色效果增強,從而減小了因蛋白質種類引起的偏差。Lowry法的試劑由兩部分組成,試劑甲相當於雙縮脲試劑(鹼性銅溶液),可與蛋白質中的肽鍵起顯色反應;試劑乙為磷鎢酸和磷鉬酸混合液,在鹼性條件下極不穩定,易被酚類化合物還原生成鉬藍和鎢藍混合物而呈藍色反應,因此蛋白質的酪氨酸和胱氨酸等可顯色,顏色深淺與蛋白質含量成正比。

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