高效液相色譜法基本原理

一、實驗目的1.瞭解高效液相色譜法分離的基本原理；2.瞭解高效液相色譜儀的基本構造；3.瞭解高效液相色譜儀的基本操作。

二、基本原理高效液相色譜（HPLC）法是以高壓下的液體為流動相，並採用顆粒極細的高效固定相的柱色譜分離技術。高效液相色譜對樣品的適用性廣，不受分析物件揮發性和熱穩定性的限制，因而彌補了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機化合物中，可用氣相色譜分析的約佔20%，而80%則需用高效液相色譜來分析。高效液相色譜和氣相色譜在基本理論方面沒有顯著不同，它們之間的重大差別在於作為流動相的液體與氣體之間的性質的差別。高效液相色譜分析原理：

（一）高效液相色譜分析的流程：由泵將儲液瓶中的溶劑吸入色譜系統，然後輸出，經流量與壓力測量之後，匯入進樣器。被測物由進樣器注入，並隨流動相透過色譜柱，在柱上進行分離後進入檢測器，檢測訊號由資料處理裝置採集與處理，並記錄色譜圖。廢液流入廢液瓶。遇到複雜的混合物分離（極性範圍比較寬）還可用梯度控制器作梯度洗脫。這和氣相色譜的程序升溫類似，不同的是氣相色譜改變溫度，而HPLC改變的是流動相極性，使樣品各組分在最佳條件下得以分離。

（二）高效液相色譜的分離過程：同其他色譜過程一樣，HPLC也是溶質在固定相和流動相之間進行的一種連續多次交換過程。它借溶質在兩相間分配係數、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質得以分離。