利用物體不同結構成分之間的折射率和厚度的差別，把透過物體不同部分的光程差轉變為振幅（光強度）的差別，經過帶有環狀光闌的聚光鏡和帶有相位片的相差物鏡實現觀測的顯微鏡。主要用於觀察活細胞或不染色的組織切片，有時也可用於觀察缺少反差的染色樣品。
把透過標本的可見光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結構間的對比度，使各種結構變得清晰可見。光線透過標本後發生折射，偏離了原來的光路，同時被延遲了1/4λ（波長），如果再增加或減少1/4λ，則光程差變為1/2λ，兩束光合軸後干涉加強，振幅增大或減下，提高反差。在構造上，相差顯微鏡有不同於普通光學顯微鏡4個特殊之處：
1.環形光闌（annular diaphragm） 位於光源與聚光器之間，作用是使透過聚光器的光線形成空心光錐，焦聚到標本上。
2.相位板（annular phaseplate）在物鏡中加了塗有氟化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。分為兩種：
（1）A+相板：將直射光推遲1/4λ，兩組光波合軸後光波相加，振幅加大，標本結構比周圍介質更加變亮，形成亮反差（或稱負反差）。
（2）B+相板：將衍射光推遲1/4λ，兩組光線合軸後光波相減，振幅變小，形成暗反差（或稱正反差），結構比周圍介質更加變暗。
3.合軸調節望遠鏡：用於調節環狀光闌的像與相板共軛面完全吻合。
利用物體不同結構成分之間的折射率和厚度的差別，把透過物體不同部分的光程差轉變為振幅（光強度）的差別，經過帶有環狀光闌的聚光鏡和帶有相位片的相差物鏡實現觀測的顯微鏡。主要用於觀察活細胞或不染色的組織切片，有時也可用於觀察缺少反差的染色樣品。
把透過標本的可見光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結構間的對比度，使各種結構變得清晰可見。光線透過標本後發生折射，偏離了原來的光路，同時被延遲了1/4λ（波長），如果再增加或減少1/4λ，則光程差變為1/2λ，兩束光合軸後干涉加強，振幅增大或減下，提高反差。在構造上，相差顯微鏡有不同於普通光學顯微鏡4個特殊之處：
1.環形光闌（annular diaphragm） 位於光源與聚光器之間，作用是使透過聚光器的光線形成空心光錐，焦聚到標本上。
2.相位板（annular phaseplate）在物鏡中加了塗有氟化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。分為兩種：
（1）A+相板：將直射光推遲1/4λ，兩組光波合軸後光波相加，振幅加大，標本結構比周圍介質更加變亮，形成亮反差（或稱負反差）。
（2）B+相板：將衍射光推遲1/4λ，兩組光線合軸後光波相減，振幅變小，形成暗反差（或稱正反差），結構比周圍介質更加變暗。
3.合軸調節望遠鏡：用於調節環狀光闌的像與相板共軛面完全吻合。