Real-Time PCR結果不齊，建議使用多種方法多次嘗試。一般出現不齊是因為加樣量不一致，相差少許是由於實驗誤差。
Real-Time PCR 技術，又稱實時定量熒光PCR，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光訊號累積實時監測整個PCR程序，最後透過標準曲線對未知模板進行總量分析或透過Ct值對模板進行相對定量。
常用方法：SYBR green（熒光染料摻入法） 和Taqman probe （探針法）
一、SYBR green
在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈後，發射熒光訊號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光訊號，從而保證熒光訊號的增加與PCR產物的增加完全同步。適用性和特點：
1、靈敏度高：使用SYBR可使熒光效果增強到1000倍以上
2、通用性好,不需要設計探針,方法簡便,省時,價格低廉。
3、通用型方法，在國內外科研中普遍使用。
4、高通量大規模的定量PCR檢測
5、專一性要求不高的定量PCR檢測。
二、Taqman Probe:
PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光訊號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光訊號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光訊號的累積與PCR產物形成完全同步。
適用性和特點：
1、具有高適應性和可靠性，實驗結果穩定重複性好，特異性更高。
2、適用於擴增序列專一的體系的檢測。
3、樣品中靶基因含量過低的定量PCR檢測。
4、靶基因的特異序列較短，無論怎樣最佳化引物設計條件都不能解決。
5、存在與靶基因同源的序列，在PCR中容易出現非特異性擴增，對特異性要求較高的定量。
6、廣泛用於人類傳染病的診斷和病原定量,在動物病原體基因的檢測,畜禽產品的檢驗檢疫,生物製品的鑑定。
Real-Time PCR結果不齊，建議使用多種方法多次嘗試。一般出現不齊是因為加樣量不一致，相差少許是由於實驗誤差。
Real-Time PCR 技術，又稱實時定量熒光PCR，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光訊號累積實時監測整個PCR程序，最後透過標準曲線對未知模板進行總量分析或透過Ct值對模板進行相對定量。
常用方法：SYBR green（熒光染料摻入法） 和Taqman probe （探針法）
一、SYBR green
在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈後，發射熒光訊號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光訊號，從而保證熒光訊號的增加與PCR產物的增加完全同步。適用性和特點：
1、靈敏度高：使用SYBR可使熒光效果增強到1000倍以上
2、通用性好,不需要設計探針,方法簡便,省時,價格低廉。
3、通用型方法，在國內外科研中普遍使用。
4、高通量大規模的定量PCR檢測
5、專一性要求不高的定量PCR檢測。
二、Taqman Probe:
PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光訊號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光訊號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光訊號的累積與PCR產物形成完全同步。
適用性和特點：
1、具有高適應性和可靠性，實驗結果穩定重複性好，特異性更高。
2、適用於擴增序列專一的體系的檢測。
3、樣品中靶基因含量過低的定量PCR檢測。
4、靶基因的特異序列較短，無論怎樣最佳化引物設計條件都不能解決。
5、存在與靶基因同源的序列，在PCR中容易出現非特異性擴增，對特異性要求較高的定量。
6、廣泛用於人類傳染病的診斷和病原定量,在動物病原體基因的檢測,畜禽產品的檢驗檢疫,生物製品的鑑定。