你好，在PCR擴增中，目標片段的長度主要是由引物的特異性結合來控制的。在第一次擴增中，因為DNA兩條鏈分別只有一條引物結合，這樣taq聚合酶理論上是延伸很長的距離的，但由於我們控制了延伸時間，新合成的鏈不會長的非常多。所以第一次擴增得到的DNA是兩條長（原始鏈），兩條中等長（新鏈）。 第二次擴增反應時，引物和上次反應合成的鏈結合，之前上游引物指導和成的鏈現在在3‘端和下游引物結合，而下游指導合成的鏈在它的3’端上游引物結合，此時，新合成的鏈只會合成到上一次合成的鏈引物的起始處，因為這條鏈的5’端只有這麼長。這樣第二次合成的DNA，就有兩條目標DNA分子長度的鏈（新鏈），和第一次合成的中等長度的鏈（舊鏈）。 第三次反應的時候，第二次反應的鏈再次結合引物的時候，就是我們的目標雙鏈DNA分子了。

第一代PCR就是我們目前最常用的終點PCR技術，透過凝膠電泳獲得定性的結果。風靡全球的實時定量PCR技術為第二代，它利用熒光試劑監控擴增，來實現相對定量。在開展基因表達分析時，需要標準曲線或參考基因來協助定量。

微滴式數字PCR則為第三代PCR，它不再依賴Cq值或內參基因，即可確定低至單複製的待檢靶分子的絕對數目。微滴技術讓數字PCR更低成本，且更實用。

在不久前推出了QX100™ 微滴式數字PCR系統，帶來了ddPCR技術。此係統能夠確定核酸分子的絕對數目，讓研究人員無比精確地研究生物學。Hindson博士表示，ddPCR克服了之前數字PCR系統的缺陷，如成本高、通量有限且流程複雜。

原因：一般需要獲得的基因是有一定長度的，而模板長度很長。

第一個迴圈，引物與模板互補，此時變成兩個模板，但因為模板很長，沒有什麼終止擴增，所以第一個迴圈擴增出來的新片段很長很長。

第二個迴圈以新的長片段為模板進行，但新片段的一端是引物開頭的，所以第二個迴圈得到的片段就是我們需要的長度，但只是一條鏈，所以還不能分離出目的基因。

第三個迴圈：當以第二個迴圈得到的新片段為模板時，因為這個片段的長度就是需要擴增的長度，所以當第三個迴圈完成時，這個片段是需要的長度，且是雙鏈DNA，這就得到了需要的目的基因了。

綜上，至少要3個迴圈才能分離出目的基因（即PRC是第三輪才能獲得的目的基因）