溼熱消毒滅菌是由空氣和水蒸氣導熱，傳熱快，穿透力強，溼熱滅菌法比干熱滅菌法所需溫度低、時間短。
（1）煮沸法 將水煮沸至100℃，保持5-10分鐘可殺滅繁殖體，保持1——3小時可殺滅芽胞。在水中加入碳酸氫鈉至1％——2％濃度時，沸點可達105℃，能增強殺菌作用，還可去汙防鏽。在高原地區氣壓低、沸點低的情況下，要延長消毒時間（海拔每增高300m，需延長消毒時間2分鐘）。此法適用於不怕潮溼耐高溫的搪瓷、金屬、玻璃、橡膠類物品。
煮沸前物品涮洗乾淨，開啟軸節或蓋子，將其全部浸入水中。大小相同的碗、盆等均不能重疊，以確保物品各面與水接觸。銳利、細小、易損物品用紗布包裹，以免撞擊或散落。玻璃、搪瓷類放入冷水或溫水中煮；金屬、橡膠類則待水沸後放入。消毒時間均從水沸後開始計時。若中途再加入物品，則重新計時，消毒後及時取出物品，保持其無菌狀態。
經煮沸滅菌的物品。“無菌”有效期不超過6小時。
（2）高壓蒸汽滅菌法 高壓蒸汽滅菌器裝置嚴密，輸入蒸汽不外逸，溫度隨蒸汽壓力增高而升高，當壓力增至103——206kPa時，溼度可達121.3-132℃。高壓蒸汽滅菌法就是利用高壓和高熱釋放的潛熱進行滅菌，為目前可靠而有效的滅菌方法。適用於耐高溫、高壓，不怕潮溼的物品，如敷料、手術器械、藥品、細菌培養基等。
潛熱是指當lg100℃的水蒸汽變成lg100℃水時，釋放出2255.2J的熱量。
高壓蒸汽滅菌的關鍵問題是為熱的傳導提供良好條件，而其中最重要的是使冷空氣從滅菌器中順利排出。因為冷空氣導熱性差，阻礙蒸汽接觸欲滅菌物品，並且還可減低蒸汽分壓使之不能達到應有的溫度。
手提式高壓蒸汽滅菌器：為金屬圓筒，分為二層，隔層內盛水，有蓋，可以旋緊，加熱後產生蒸汽。鍋外有壓力錶，當蒸汽壓力升高時，溫度也隨之相應升高。該滅菌器體積小，可自發蒸汽，便於攜帶。
操作方法如下：在滅菌器中盛水3000ml；將擬滅菌的物品隨同盛裝的桶放入滅菌器內；將蓋子上的排氣軟管插於鋁桶內壁的的方管中；蓋好蓋子，擰緊元寶螺絲，勿使漏氣；鍋下加熱，開啟排氣活門，放出冷空氣（一般在水沸後排氣10-15分鐘左右），關閉放氣活門，使壓力逐漸上升至103kPa，溫度達121.3℃，維持20分鐘後，排氣至“0”時，慢慢開啟蓋子。如果突然開蓋，冷空氣大量進入，蒸汽凝成水滴，使物品潮溼，且玻璃類易發生爆裂。
臥式高壓蒸汽滅菌器；其結構原理同手提式高壓蒸汽滅菌器，因其體積大，一次可滅菌大量物品。操作人員須經專業培訓，合格後方能上崗。
後再關閉放氣開關，待夾層壓力錶達到滅菌所需壓力時（約10分鐘後），將蒸汽控制閥移至“消毒”位置，使蒸汽進入櫃室，櫃室內的冷空氣及冷凝水可由櫃室阻氣器排出，待櫃室的壓力升到103——137kPa，溫度達121.3——126.2℃時，轉動壓力調節閥，使壓力與溫度保持恆定。維持30分鐘後，將蒸汽控制閥移至“排氣”位置，排氣畢，將蒸汽控制閥移至“乾燥”位置；物品乾燥後，將蒸氣控制閥移至“關閉”位置，待壓力指標到“0”位置和熱空氣排盡後，才能開啟櫃門，取出物品；關緊進氣閥。
預真空式高壓蒸汽滅菌器；在通入蒸汽前有一預處理階段，即櫃室內抽負壓至2.6kPa（空氣排除約98％），所以，預真空高壓蒸汽滅菌器除有下排氣式所具備的滅菌系統、蒸汽輸送系統、控制系統、安全系統和儀表監測指示系統外，增加抽負壓系統和空氣過濾系統。機器運轉由電腦控制。
預真空式高壓蒸汽滅菌器溼度可達132——135℃，具有滅菌週期快、效率高，完成整個滅菌週期只需25分鐘，節省人力、時間和能源；冷空氣排除較可靠與徹底；對物品的包裝、排放要求較寬，而且真空狀態下物品不易氧化損壞的特點。但裝置費、維修費較高，對櫃體密封性要求較高，漏氣量每分鐘不得使負壓升高值超過0.13kPa.存在小裝量效應，即欲滅菌物品放得過少，滅菌效果反而較差。小裝量效應的發生主要由於物品體積愈小，在櫃內殘留空氣愈多，對蒸汽接觸物品的阻隔作用愈大所致，瓶裝液體不用此法滅菌。
操作方法如下：開啟蒸汽管道閥門，首先將櫃室夾層和管道內的空氣和積水排淨，使夾套內達到預定壓力和溫度（104——167℃），將待滅菌物品裝入櫃室，關緊櫃門。櫃室內抽負壓至2.6kPa，向櫃室內輸入蒸汽，將控制閥移至“消毒”的位置。隨後機器按一定程式自動執行，諸如：“恆溫”、“排氣”、“乾燥”、“關閉”等。待恢復常壓後開啟櫃門取出物品。滅菌時使壓力達206kPa，溫度為132℃，維持4-5分鐘。
高壓蒸汽滅菌法的注意事項：
第一，無菌包不宜過大（小於50cm×30cm×30cm），不宜過緊，各包裹間要有間隙，使蒸汽能對流易滲透到包裹中央。消毒前，開啟貯槽或盒的通氣孔，有利於蒸汽流通。而且排氣時使蒸汽能迅速排出，以保持物品乾燥。消毒滅菌完畢，關閉貯槽或盒的通氣孔，以保持物品的無菌狀態。
第二，布類物品應放在金屬類物品上，否則蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮。阻礙蒸汽進入包裹中央，嚴重影響滅菌效果。
第三，定期檢查滅菌效果。經高壓蒸汽滅菌的無菌包、無菌容器有效期以1周為宜。
溼熱消毒滅菌是由空氣和水蒸氣導熱，傳熱快，穿透力強，溼熱滅菌法比干熱滅菌法所需溫度低、時間短。
（1）煮沸法 將水煮沸至100℃，保持5-10分鐘可殺滅繁殖體，保持1——3小時可殺滅芽胞。在水中加入碳酸氫鈉至1％——2％濃度時，沸點可達105℃，能增強殺菌作用，還可去汙防鏽。在高原地區氣壓低、沸點低的情況下，要延長消毒時間（海拔每增高300m，需延長消毒時間2分鐘）。此法適用於不怕潮溼耐高溫的搪瓷、金屬、玻璃、橡膠類物品。
煮沸前物品涮洗乾淨，開啟軸節或蓋子，將其全部浸入水中。大小相同的碗、盆等均不能重疊，以確保物品各面與水接觸。銳利、細小、易損物品用紗布包裹，以免撞擊或散落。玻璃、搪瓷類放入冷水或溫水中煮；金屬、橡膠類則待水沸後放入。消毒時間均從水沸後開始計時。若中途再加入物品，則重新計時，消毒後及時取出物品，保持其無菌狀態。
經煮沸滅菌的物品。“無菌”有效期不超過6小時。
（2）高壓蒸汽滅菌法 高壓蒸汽滅菌器裝置嚴密，輸入蒸汽不外逸，溫度隨蒸汽壓力增高而升高，當壓力增至103——206kPa時，溼度可達121.3-132℃。高壓蒸汽滅菌法就是利用高壓和高熱釋放的潛熱進行滅菌，為目前可靠而有效的滅菌方法。適用於耐高溫、高壓，不怕潮溼的物品，如敷料、手術器械、藥品、細菌培養基等。
潛熱是指當lg100℃的水蒸汽變成lg100℃水時，釋放出2255.2J的熱量。
高壓蒸汽滅菌的關鍵問題是為熱的傳導提供良好條件，而其中最重要的是使冷空氣從滅菌器中順利排出。因為冷空氣導熱性差，阻礙蒸汽接觸欲滅菌物品，並且還可減低蒸汽分壓使之不能達到應有的溫度。
手提式高壓蒸汽滅菌器：為金屬圓筒，分為二層，隔層內盛水，有蓋，可以旋緊，加熱後產生蒸汽。鍋外有壓力錶，當蒸汽壓力升高時，溫度也隨之相應升高。該滅菌器體積小，可自發蒸汽，便於攜帶。
操作方法如下：在滅菌器中盛水3000ml；將擬滅菌的物品隨同盛裝的桶放入滅菌器內；將蓋子上的排氣軟管插於鋁桶內壁的的方管中；蓋好蓋子，擰緊元寶螺絲，勿使漏氣；鍋下加熱，開啟排氣活門，放出冷空氣（一般在水沸後排氣10-15分鐘左右），關閉放氣活門，使壓力逐漸上升至103kPa，溫度達121.3℃，維持20分鐘後，排氣至“0”時，慢慢開啟蓋子。如果突然開蓋，冷空氣大量進入，蒸汽凝成水滴，使物品潮溼，且玻璃類易發生爆裂。
臥式高壓蒸汽滅菌器；其結構原理同手提式高壓蒸汽滅菌器，因其體積大，一次可滅菌大量物品。操作人員須經專業培訓，合格後方能上崗。
後再關閉放氣開關，待夾層壓力錶達到滅菌所需壓力時（約10分鐘後），將蒸汽控制閥移至“消毒”位置，使蒸汽進入櫃室，櫃室內的冷空氣及冷凝水可由櫃室阻氣器排出，待櫃室的壓力升到103——137kPa，溫度達121.3——126.2℃時，轉動壓力調節閥，使壓力與溫度保持恆定。維持30分鐘後，將蒸汽控制閥移至“排氣”位置，排氣畢，將蒸汽控制閥移至“乾燥”位置；物品乾燥後，將蒸氣控制閥移至“關閉”位置，待壓力指標到“0”位置和熱空氣排盡後，才能開啟櫃門，取出物品；關緊進氣閥。
預真空式高壓蒸汽滅菌器；在通入蒸汽前有一預處理階段，即櫃室內抽負壓至2.6kPa（空氣排除約98％），所以，預真空高壓蒸汽滅菌器除有下排氣式所具備的滅菌系統、蒸汽輸送系統、控制系統、安全系統和儀表監測指示系統外，增加抽負壓系統和空氣過濾系統。機器運轉由電腦控制。
預真空式高壓蒸汽滅菌器溼度可達132——135℃，具有滅菌週期快、效率高，完成整個滅菌週期只需25分鐘，節省人力、時間和能源；冷空氣排除較可靠與徹底；對物品的包裝、排放要求較寬，而且真空狀態下物品不易氧化損壞的特點。但裝置費、維修費較高，對櫃體密封性要求較高，漏氣量每分鐘不得使負壓升高值超過0.13kPa.存在小裝量效應，即欲滅菌物品放得過少，滅菌效果反而較差。小裝量效應的發生主要由於物品體積愈小，在櫃內殘留空氣愈多，對蒸汽接觸物品的阻隔作用愈大所致，瓶裝液體不用此法滅菌。
操作方法如下：開啟蒸汽管道閥門，首先將櫃室夾層和管道內的空氣和積水排淨，使夾套內達到預定壓力和溫度（104——167℃），將待滅菌物品裝入櫃室，關緊櫃門。櫃室內抽負壓至2.6kPa，向櫃室內輸入蒸汽，將控制閥移至“消毒”的位置。隨後機器按一定程式自動執行，諸如：“恆溫”、“排氣”、“乾燥”、“關閉”等。待恢復常壓後開啟櫃門取出物品。滅菌時使壓力達206kPa，溫度為132℃，維持4-5分鐘。
高壓蒸汽滅菌法的注意事項：
第一，無菌包不宜過大（小於50cm×30cm×30cm），不宜過緊，各包裹間要有間隙，使蒸汽能對流易滲透到包裹中央。消毒前，開啟貯槽或盒的通氣孔，有利於蒸汽流通。而且排氣時使蒸汽能迅速排出，以保持物品乾燥。消毒滅菌完畢，關閉貯槽或盒的通氣孔，以保持物品的無菌狀態。
第二，布類物品應放在金屬類物品上，否則蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮。阻礙蒸汽進入包裹中央，嚴重影響滅菌效果。
第三，定期檢查滅菌效果。經高壓蒸汽滅菌的無菌包、無菌容器有效期以1周為宜。