謝邀了。as we all know,基因文庫中篩選某一克隆的常用辦法是分子雜交.首先把屬於一個文庫的細菌或噬菌體以較低密度接種在培養皿上以取得相當分散的菌落或噬菌斑,然後用硝酸纖維濾膜吸印,使培養皿和濾膜的相對應的位置上具有相同的克隆.同時另行製備供分子雜交用的探針.為了篩選真核生物的某種基因,常從它的轉錄產物mRNA經反向轉錄（見中心法則）合成相應的互補 DNA(cDNA),再加入用32P標記的核苷三磷酸,用DNA多聚酶I切口移位方法制成有同位素標記的探針.把探針 DNA和硝酸纖維濾膜上的菌落或噬菌體分別進行變性處理,然後進行分子雜交.再將 X光底片覆蓋在經過處理的濾膜上以進行放射自顯影.在培養皿上找出和 X光底片上的黑點相對應的菌落或噬菌斑,這些菌落或噬菌體中便包含著所需要的基因.經過擴增便能得到大量的細菌或噬菌體,從中可以分離出所需基因的DNA片段.<br>不需要模板,但需要知道其序列,以構建探針去捕獲目的基因.<br>為了更形象地解答你的問題,我又去搜索了些參考資料.看到了一個不錯的比喻,我現在試著借用來解答你的疑惑.<br>如果把基因文庫看作一座圖書館,那麼目的基因就是一本你感興趣的書.上面回答的是借書的流程,而你現在的補充問題則屬於借書前的工作.<br>如果你只是說要借一本書,卻不知道書名、作者、出版社、裡面的人物和情節等所有內容,那麼縱使有通天的本領,也不可能把這本書從圖書館裡幫你調取出來.<br>回到基因文庫和目的基因上來.既然是目的基因,那麼,對這個基因其實是有一定程度瞭解的,只是我們手裡沒有實物.我們要做的不僅是把它調取出來,而是在調取後拿它去做後續工作,這才是重要的.就像借了書要讀一樣.<br>核苷酸序列資訊就相當於書名.如果不知道,你需要能透過其他途徑去查詢獲取.就像透過小說主人公的名字去查得書名最後借到書一樣.<br>不知解釋清楚沒有?
謝邀了。as we all know,基因文庫中篩選某一克隆的常用辦法是分子雜交.首先把屬於一個文庫的細菌或噬菌體以較低密度接種在培養皿上以取得相當分散的菌落或噬菌斑,然後用硝酸纖維濾膜吸印,使培養皿和濾膜的相對應的位置上具有相同的克隆.同時另行製備供分子雜交用的探針.為了篩選真核生物的某種基因,常從它的轉錄產物mRNA經反向轉錄（見中心法則）合成相應的互補 DNA(cDNA),再加入用32P標記的核苷三磷酸,用DNA多聚酶I切口移位方法制成有同位素標記的探針.把探針 DNA和硝酸纖維濾膜上的菌落或噬菌體分別進行變性處理,然後進行分子雜交.再將 X光底片覆蓋在經過處理的濾膜上以進行放射自顯影.在培養皿上找出和 X光底片上的黑點相對應的菌落或噬菌斑,這些菌落或噬菌體中便包含著所需要的基因.經過擴增便能得到大量的細菌或噬菌體,從中可以分離出所需基因的DNA片段.<br>不需要模板,但需要知道其序列,以構建探針去捕獲目的基因.<br>為了更形象地解答你的問題,我又去搜索了些參考資料.看到了一個不錯的比喻,我現在試著借用來解答你的疑惑.<br>如果把基因文庫看作一座圖書館,那麼目的基因就是一本你感興趣的書.上面回答的是借書的流程,而你現在的補充問題則屬於借書前的工作.<br>如果你只是說要借一本書,卻不知道書名、作者、出版社、裡面的人物和情節等所有內容,那麼縱使有通天的本領,也不可能把這本書從圖書館裡幫你調取出來.<br>回到基因文庫和目的基因上來.既然是目的基因,那麼,對這個基因其實是有一定程度瞭解的,只是我們手裡沒有實物.我們要做的不僅是把它調取出來,而是在調取後拿它去做後續工作,這才是重要的.就像借了書要讀一樣.<br>核苷酸序列資訊就相當於書名.如果不知道,你需要能透過其他途徑去查詢獲取.就像透過小說主人公的名字去查得書名最後借到書一樣.<br>不知解釋清楚沒有?