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  • 1 # Wanggggjj

    非標記抗體酶法:PAP法是檢驗技師考試的內容,醫學教育網蒐集整理相關內容供大家參考。

      1.PAP的特徵:PAP複合物的形成不同於其他抗原抗體反應,在抗原稍過量時,所有的抗HRP抗體均參與形成可溶性PAP複合物,僅殘留少許遊離的HRP,而大多數抗原抗體反應需要抗原絕對過量才能形成可溶性複合物。PAP複合物的形狀相當穩定,不受抗原量的影響,無論最初加入的抗原抗體過量與否,最終形成的PAP複合物其HRP/抗HRP之比絕大部分為3:2.應用離心沉降、液相擴散等方法分析表明:PAP複合物沉降係數為ll.5s,分子量為400~430kD,由此可推算出酶與抗體之比為3:2,即每個PAP生命物由3個HRP分子和2個抗HRP抗體組成,呈五角形結構,3個角為HRP,另兩個角為抗HRP抗體。採用H202-DAB染色,電鏡下已經觀察到PAP複合物五角形環狀結構,直徑平均21nm.這種結構異常穩定。據報告PAP複合物的抗HRP抗體與HRP結合常數為108,在此可溶性複合物中,即使存在少量遊離HRP,亦不影響其穩定性。

      2.PAP染色原理及步驟

      原理:與酶橋法相似,都是藉助橋抗體將酶連結在與組織抗原結合的第一抗體上,所不同的是PAP法將酶橋法的步驟3、4合併為1,用PAP複合物代替,即第三步用PAP複合物孵育切片,故稱PAP法。PAP複合物中的抗HRP抗體和第一抗體為相同種屬動物的IgG,所以橋抗體能夠作為“橋”將PAP複合物連結在第一抗體上。

      3.PAP法的評價:PAP法應用比較廣泛,特別是近幾年,PAP、ABC等試劑盒商品化,在科研和臨床病理診斷等中有著廣闊的前景。

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