ELISA試劑盒檢測結果判讀
操作步驟:
1、從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗所需板條,未用的板條和乾燥劑請放回鋁箔袋內壓實自封條,密封口袋,放回4℃。
2、空白孔加標準品和標本稀釋液,其餘相應孔中加標本或不同濃度標準品(100ul/孔),用封板膠紙封住反應孔,36℃孵箱孵育90分鐘。
3、提前20分鐘準備生物素化抗體工作液。
4、洗板5次。
5、空白孔加生物素化抗體稀釋液,其餘孔加入生物素化抗體工作液(100ul/孔)。用新封板膠紙封住反應孔,36℃孵箱孵育60分鐘。
6、提前20分鐘準備酶結合物工作液。避光室溫(22-25 ) ℃ 放置。
7、洗板5次。
8、空白孔加酶結合物稀釋液,其餘孔加入酶結合物工作液(100ul/孔)。用新封板膠紙封住反應孔,36℃孵箱,避光孵育30分鐘。
9、開啟酶標儀電源,預熱儀器,設定好檢測程式。
10、洗板5次。
11、加入顯色底物(TMB)100ul/孔,避光36℃孵箱,避光孵育15分鐘。
12、加入終止液100ul/孔, 混勻後即刻測量OD450值(3分鐘內)。在儀器儲存讀數結果並列印一份紙質結果。
13、實驗完畢後將未用完的試劑按規定的儲存溫度放回電冰箱儲存至有效期結束。建議儲存酶標板框,以備下次或者今後試驗使用。
結果判斷:
1、每個標準品和標本的OD值應減去空白孔的OD值。
2、手工繪製標準曲線，以標準品濃度作橫座標,OD值作縱座標,以平滑線連線各標準品的座標點。透過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。
3、若標本OD值高於標準曲線上限,應適當稀釋後重測,計算濃度時應乘以稀釋倍數。靈敏度、特異性和重複性:
● 靈敏度：zui小可測人IL-4達7pg/ml。
● 特異性：不與IL－1,2,3,5,6,8,10,12,IFN,TNF及sTNF-RII等反應。
● 重複性：板內,板間變異係數均。
ELISA試劑盒檢測結果判讀
操作步驟:
1、從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗所需板條,未用的板條和乾燥劑請放回鋁箔袋內壓實自封條,密封口袋,放回4℃。
2、空白孔加標準品和標本稀釋液,其餘相應孔中加標本或不同濃度標準品(100ul/孔),用封板膠紙封住反應孔,36℃孵箱孵育90分鐘。
3、提前20分鐘準備生物素化抗體工作液。
4、洗板5次。
5、空白孔加生物素化抗體稀釋液,其餘孔加入生物素化抗體工作液(100ul/孔)。用新封板膠紙封住反應孔,36℃孵箱孵育60分鐘。
6、提前20分鐘準備酶結合物工作液。避光室溫(22-25 ) ℃ 放置。
7、洗板5次。
8、空白孔加酶結合物稀釋液,其餘孔加入酶結合物工作液(100ul/孔)。用新封板膠紙封住反應孔,36℃孵箱,避光孵育30分鐘。
9、開啟酶標儀電源,預熱儀器,設定好檢測程式。
10、洗板5次。
11、加入顯色底物(TMB)100ul/孔,避光36℃孵箱,避光孵育15分鐘。
12、加入終止液100ul/孔, 混勻後即刻測量OD450值(3分鐘內)。在儀器儲存讀數結果並列印一份紙質結果。
13、實驗完畢後將未用完的試劑按規定的儲存溫度放回電冰箱儲存至有效期結束。建議儲存酶標板框,以備下次或者今後試驗使用。
結果判斷:
1、每個標準品和標本的OD值應減去空白孔的OD值。
2、手工繪製標準曲線，以標準品濃度作橫座標,OD值作縱座標,以平滑線連線各標準品的座標點。透過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。
3、若標本OD值高於標準曲線上限,應適當稀釋後重測,計算濃度時應乘以稀釋倍數。靈敏度、特異性和重複性:
● 靈敏度：zui小可測人IL-4達7pg/ml。
● 特異性：不與IL－1,2,3,5,6,8,10,12,IFN,TNF及sTNF-RII等反應。
● 重複性：板內,板間變異係數均。